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毛细管气相色谱法测定雪抑乐中冰片的含量

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  【摘要】   目的建立毛细管气相色谱法测定雪抑乐中冰片的含量。方法色谱柱为SPBTM-1 Capillary Column (30 m×0.25 mm×0.25 μm);FID检测器;柱温100℃;进样器温度235℃;检测器温度245℃;载气N2;流速1.2 ml・min-1;分流比1∶10;内标萘。结果毛细管气相色谱法测定冰片的分离度和线性良好,龙脑平均回收率为96.44%(RSD = 0.90%,n = 6),异龙脑平均回收率为96.78%(RSD = 1.15%,n = 6)。结论该方法简便、快速、准确,可用于雪抑乐质量控制。

  【关键词】 毛细管气相色谱法;雪抑乐;冰片

  Abstract:ObjectiveTo establish a Capillary GC method for the determination of Bornol in Xueyile.MethodsChromatographic conditions were SPBTM-1 Capillary Column (30 m×0.25 mm×0.25μm),Detector:FID,Column temperature:100℃,injector temperature:235℃,detector temperature:245℃,Carrier gas:N2,Flow rate:1.2 ml・min-1,Split ratio 1∶10,and Internal standard:naphthalene.ResultsThe isolation and the linearity were fine with the recovery rate of bornol 96.44%(RSD= 0.90%,n = 6),isobornol 96.78%(RSD=1.15%,n=6).ConclusionThe method is accurate,rapid and simple.It can be applied for the quality control of bornol.

  Key words:Capillary GC; Xueyile ; Bornol

  雪抑乐是泸州医学院正在研制的天然药物复方制剂,用于治疗中、轻度抑郁症。冰片是其中重要的辅助成分,主要作用是促进药物的吸收,其含量的多少直接影响药效发挥程度[1,2]。因此本文建立气相色谱法测定冰片中龙脑和异龙脑的含量[3,4],作为雪抑乐质量控制的指标之一。

  1 仪器与试药

  1.1 仪器SP-3420型气相色谱仪(北京北分瑞利分析仪器公司);ZB-2010色谱工作站(四川知本分析测试技术公司);WYB-Ⅱ型静音无油空气泵、SPGN-2A型高纯氮发生器、SPGH-300型高纯氢发生器(北京中亚气体仪器研究所)。

  1.2 试药雪抑乐(批号20070516,20070520,20070524,自制);雪抑乐缺冰片阴性对照品(自制);龙脑(中国药品生物制品检定所,批号110881-200605);异龙脑对照品(中国药品生物制品检定所,批号1512-200201);萘(分析纯,天津市登峰化学试剂公司);其它试剂均为分析纯。

  2 方法和结果

  2.1 色谱条件SPBTM-1 Capillary Column (30 m×0.25 mm,0.25 μm),柱温100℃(测定,240℃冲柱);检测器为氢火焰离子化检测器(FID),温度245℃;进样器温度235℃;辅助温度245℃;量程11 mV;载气为高纯氮气,流量1.2 ml・min-1(0.1MPa);补充气为氮气,流量40 ml・min-1;燃烧气为氢气,流量40 ml・min-1;助燃气为空气,流量500 ml・min-1;分流比1:10;内标:萘。

  2.2 溶液的配制

  2.2.1 内标溶液精密称取萘0.046 3 g,用氯仿溶解并定容至250 ml作为内标溶液。

  2.2.2 对照品溶液精密称取龙脑对照品0.010 0 g,异龙脑0.010 0 g,用氯仿溶解并定容至5 ml,即得。

  2.2.3 样品溶液精密吸取雪抑乐0.3 ml于10 ml容量瓶中,加氯仿适量,振摇提取10 min,精密加入内标溶液0.8 ml,用氯仿稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得。

  2.2.4 阴性对照品溶液精密吸取雪抑乐缺冰片阴性对照品0.3 ml于10 ml容量瓶中,加氯仿适量,振摇提取10 min,用氯仿稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得。

  2.3 系统适用性实验

  取20070516批样品溶液1 μl进样,按上述色谱条件测定,异龙脑峰(R= 2.6)、龙脑峰(R=2.7)以及内标峰(R=1.6)分离良好,见图1中“1”。

  2.4 阴性干扰实验精密吸取1 μl阴性对照品溶液进样未发现龙脑与异龙脑峰,表明雪抑乐中其他成分对冰片的测定无干扰,见图1中“3”。

  2.5 线性关系考察分别精密吸取上述冰片对照品溶液0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 ml于5 ml容量瓶中,精密加入内标溶液0.4 ml,用氯仿稀释至刻度。每个浓度分别取1 μl进样3次,分别以龙脑和异龙脑峰面积与内标物峰面积比平均值(A)对浓度比(C)进行回归处理,得龙脑回归方程为A=-0.00 1 0+0.806 3C(r = 0.999 1),表明龙脑在0.040 0~0.200 0 mg・ml-1范围内具有良好的线性关系。异龙脑回归方程为A=-0.003 7+0.882 9C(r = 0.999 9),表明异龙脑在0.040 0~0.200 0 mg・ml-1范围内具有良好的线性关系。

  2.6 精密度实验精密吸取“2.2.2“项下对照品溶液0.3 ml于5 ml量瓶中,精密加入内标溶液0.4 ml,用氯仿稀释至刻度,取1 μl连续进5针,按上述色谱条件测定龙脑和异龙脑与内标物的峰面积比值,龙脑RSD为1.05%(n = 5),异龙脑R为0.54%(n= 5)。

  2.7 重复性实验精密吸取20070516批样品0.3 ml各5份,按“2.2.3”方法配制样品溶液,各吸取1 μl进样,按上述色谱条件测定龙脑和异龙脑与内标物的峰面积比值,龙脑RSD为1.29%(n = 5),异龙脑RSD为1.06%(n = 5)。

  2.8 稳定性实验精密吸取20070516批样品溶液1 μl进样,每间隔1h测定1次,共8次,结果龙脑、异龙脑与内标物的峰面积比值无显著变化,龙脑RSD为1.18%(n = 8),异龙脑RSD为1.50%(n = 8),表明本法在8 h内稳定。

  2.9 加样回收率实验取20070516批样品溶液0.3 ml(龙脑含量为5.406 mg・ml-1,异龙脑含量为3.354 mg・ml-1)于10 ml容量瓶中,分别精密加入对照品溶液0.05,0.1,0.15 ,0.2,0.25,0.3 ml,加氯仿适量,振摇提取10 min,精密加入内标溶液0.8 ml,用氯仿稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液1 μl进样连续测定地3次,取平均值计算回收率(见表1)。龙脑平均回收率为96.44%(n = 6),异龙脑平均回收率为96.78%(n= 6)。表1 回收率实验结果(略)

  2.10 样品含量测定取20070516,20070520,20070524 3批样品,按“2.2.3”法配制样品溶液,取1μl,连续进样2次,取平均值计算含量。结果见表2。表2 样品含量测定结(略)

  3 讨论

  本实验旨在对雪抑乐中主要辅助成分冰片含量测定方法进行研究,以控制其质量,保证药效的充分、快速发挥。含量测定方法学的考察结果显示,本法操作简便、专属准确,具有良好的重复性,可作为雪抑乐临床前研究质量标准中的检查项。

  作者曾采用10%PEG-20M填充柱[5]进行测定,结果柱效偏低,达不到分离要求,且检测时间较长(37 min),因此改用毛细管柱。

  【参考文献】

  [1]魏雪芳,陈杰.冰片提高生物利用度的研究进展[J].中草药,2005,36(7):1106.

  [2]唐海涛,李力先,张 健,等.冰片开发血脑屏障的研究进展[J].中国神经肿瘤杂志,2005,3(2):124.

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