毛细管气相色谱法测定雪抑乐中冰片的含量

　　【摘要】 　　目的建立毛细管气相色谱法测定雪抑乐中冰片的含量。方法色谱柱为SPBTM-1 Capillary Column (30 m×0.25 mm×0.25 μm)；FID检测器；柱温100℃；进样器温度235℃；检测器温度245℃；载气N2；流速1.2 ml・min-1；分流比1∶10；内标萘。结果毛细管气相色谱法测定冰片的分离度和线性良好，龙脑平均回收率为96.44%（RSD = 0.90%,n = 6），异龙脑平均回收率为96.78%（RSD = 1.15%,n = 6）。结论该方法简便、快速、准确，可用于雪抑乐质量控制。

　　【关键词】  毛细管气相色谱法；雪抑乐；冰片

　　Abstract:ObjectiveTo establish a Capillary GC method for the determination of Bornol in Xueyile.MethodsChromatographic conditions were SPBTM-1 Capillary Column  (30 m×0.25 mm×0.25μm),Detector:FID,Column temperature:100℃,injector temperature:235℃,detector temperature:245℃,Carrier gas:N2,Flow rate:1.2 ml・min-1,Split ratio 1∶10,and Internal standard:naphthalene.ResultsThe isolation and the linearity were fine with the recovery rate of bornol 96.44％（RSD= 0.90%,n = 6），isobornol 96.78％（RSD=1.15%,n=6）.ConclusionThe method is accurate，rapid and simple.It can be applied for the quality control of bornol．

　　Key words：Capillary GC;  Xueyile ;  Bornol

　　雪抑乐是泸州医学院正在研制的天然药物复方制剂，用于治疗中、轻度抑郁症。冰片是其中重要的辅助成分，主要作用是促进药物的吸收，其含量的多少直接影响药效发挥程度［1,2］。因此本文建立气相色谱法测定冰片中龙脑和异龙脑的含量［3,4］，作为雪抑乐质量控制的指标之一。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器SP-3420型气相色谱仪（北京北分瑞利分析仪器公司）；ZB-2010色谱工作站（四川知本分析测试技术公司）；WYB-Ⅱ型静音无油空气泵、SPGN-2A型高纯氮发生器、SPGH-300型高纯氢发生器（北京中亚气体仪器研究所）。

　　1.2  试药雪抑乐（批号20070516，20070520，20070524，自制）；雪抑乐缺冰片阴性对照品（自制）；龙脑（中国药品生物制品检定所，批号110881-200605）；异龙脑对照品（中国药品生物制品检定所，批号1512-200201）；萘（分析纯，天津市登峰化学试剂公司）；其它试剂均为分析纯。

　　2  方法和结果

　　2.1  色谱条件SPBTM-1 Capillary Column  (30 m×0.25 mm，0.25 μm），柱温100℃（测定，240℃冲柱）；检测器为氢火焰离子化检测器（FID），温度245℃；进样器温度235℃；辅助温度245℃；量程11 mV；载气为高纯氮气，流量1.2 ml・min-1（0.1MPa）；补充气为氮气，流量40 ml・min-1；燃烧气为氢气，流量40 ml・min-1；助燃气为空气，流量500 ml・min-1；分流比1：10；内标：萘。

　　2.2  溶液的配制

　　2.2.1  内标溶液精密称取萘0.046 3 g，用氯仿溶解并定容至250 ml作为内标溶液。

　　2.2.2  对照品溶液精密称取龙脑对照品0.010 0 g，异龙脑0.010 0 g,用氯仿溶解并定容至5 ml，即得。

　　2.2.3  样品溶液精密吸取雪抑乐0.3 ml于10 ml容量瓶中，加氯仿适量，振摇提取10 min，精密加入内标溶液0.8 ml，用氯仿稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

　　2.2.4  阴性对照品溶液精密吸取雪抑乐缺冰片阴性对照品0.3 ml于10   ml容量瓶中，加氯仿适量，振摇提取10 min，用氯仿稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

　　2.3  系统适用性实验

　　取20070516批样品溶液1 μl进样，按上述色谱条件测定，异龙脑峰(R= 2.6)、龙脑峰（R=2.7）以及内标峰(R=1.6)分离良好，见图1中“1”。

　　2.4  阴性干扰实验精密吸取1 μl阴性对照品溶液进样未发现龙脑与异龙脑峰，表明雪抑乐中其他成分对冰片的测定无干扰，见图1中“3”。

　　2.5  线性关系考察分别精密吸取上述冰片对照品溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 ml于5 ml容量瓶中，精密加入内标溶液0.4 ml，用氯仿稀释至刻度。每个浓度分别取1 μl进样3次，分别以龙脑和异龙脑峰面积与内标物峰面积比平均值（A）对浓度比（C）进行回归处理，得龙脑回归方程为A＝-0.00 1 0+0.806 3C（r = 0.999 1），表明龙脑在0.040 0～0.200 0 mg・ml-1范围内具有良好的线性关系。异龙脑回归方程为A＝-0.003 7+0.882 9C（r = 0.999 9），表明异龙脑在0.040 0～0.200 0 mg・ml-1范围内具有良好的线性关系。

　　2.6  精密度实验精密吸取“2.2.2“项下对照品溶液0.3 ml于5 ml量瓶中，精密加入内标溶液0.4 ml，用氯仿稀释至刻度，取1 μl连续进5针，按上述色谱条件测定龙脑和异龙脑与内标物的峰面积比值，龙脑RSD为1.05％（n = 5），异龙脑R为0.54％（n= 5）。

　　2.7  重复性实验精密吸取20070516批样品0.3 ml各5份，按“2.2.3”方法配制样品溶液，各吸取1 μl进样，按上述色谱条件测定龙脑和异龙脑与内标物的峰面积比值，龙脑RSD为1.29％（n = 5），异龙脑RSD为1.06％（n = 5）。

　　2.8  稳定性实验精密吸取20070516批样品溶液1 μl进样，每间隔1h测定1次，共8次，结果龙脑、异龙脑与内标物的峰面积比值无显著变化，龙脑RSD为1.18％（n = 8），异龙脑RSD为1.50％（n = 8），表明本法在8 h内稳定。

　　2.9  加样回收率实验取20070516批样品溶液0.3 ml（龙脑含量为5.406 mg・ml-1，异龙脑含量为3.354 mg・ml-1）于10 ml容量瓶中，分别精密加入对照品溶液0.05，0.1，0.15 ，0.2，0.25，0.3 ml，加氯仿适量，振摇提取10 min，精密加入内标溶液0.8 ml，用氯仿稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液1 μl进样连续测定地3次，取平均值计算回收率（见表1）。龙脑平均回收率为96.44%（n = 6），异龙脑平均回收率为96.78%（n= 6）。表1  回收率实验结果（略）

　　2.10  样品含量测定取20070516，20070520，20070524 3批样品，按“2.2.3”法配制样品溶液，取1μl，连续进样2次，取平均值计算含量。结果见表2。表2  样品含量测定结（略）

　　3  讨论

　　本实验旨在对雪抑乐中主要辅助成分冰片含量测定方法进行研究，以控制其质量，保证药效的充分、快速发挥。含量测定方法学的考察结果显示，本法操作简便、专属准确，具有良好的重复性，可作为雪抑乐临床前研究质量标准中的检查项。

　　作者曾采用10％PEG-20M填充柱［5］进行测定，结果柱效偏低，达不到分离要求，且检测时间较长（37 min），因此改用毛细管柱。

　　【参考文献】

　　［1］魏雪芳，陈杰.冰片提高生物利用度的研究进展［J］.中草药，2005，36（7）：1106.

　　［2］唐海涛，李力先，张 健，等.冰片开发血脑屏障的研究进展［J］.中国神经肿瘤杂志，2005，3（2）：124.