免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation):IgA的分离与提纯
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(一)材料与试剂配制
1 . DEAE52 纤维素
2 . 0.10Mol/L ZnSO4 液
ZnSO4 · 7H2 O 2.88g
加水至 1 000.00ml
3 .饱和硫酸铵溶液
4 . 10 % EDTA — Na
5 . SephadexG200
6 . 0.01Mol/L pH7.4PB 液
7 . 0.10Mol/L pH6.4PB 液
8 .血清
(二)操作方法
1 .取血清加等量的 0.1Mol/L ZnSO4 液,调 pH 至 7.0 ,室温搅拌 1h ,离心去沉淀。
2 .于上清液中加入等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静置 30min 或冰箱过夜。
3 . 10 000r/min 离心 10min ,去上清。
4 .取沉淀溶于 4ml10 % EDTA - Na 溶液中。
5 .生理盐水中透析除盐。
6 .过 DE52 柱,用 0.01Mol/L pH7.4PB 液洗脱蛋白( IgG )弃去。
7 .换用 0.1Mol/L pH6.4PB 液洗脱,收集蛋白峰,即为 IgA 。
8 .再过 SephadexG200 柱,洗液为 0.01Mol/L pH7.4PBS ( 0.14Mol/L NaCl ),收集洗脱液测 OD280 值,取第一峰即为纯化 IgA 。
9 .透析、浓缩、鉴定。