免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation):IgE的分离与提纯
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(一)材料与试剂
1 .血清
2 .饱和硫酸铵溶液
3 .洗脱液 0.005Mol/L pH7.4PB 液
0.025 Mol/L pH7.4PB 液
0.01Mol/L pH7.4PBS 液 (0.14mol/L NaCl)
4 . DE52
5 . SephadexG150
(二)操作方法
1 .取血清倍比稀释后,加等量饱和( NH4 ) 2 SO4 溶液,盐析。
2 .离心取沉淀,溶于少量生理盐水中,透析、除盐。
3 .过 DE52 柱,以 0.005Mol/L pH7.4PB 液洗脱,收集洗脱蛋白峰 (IgG) ,弃去。
4 .换以 0.025Mol/L pH7.4 PB 液洗脱,洗下的蛋白峰主要是 IgE 。
5 .透析除盐。
6 .过 G150 柱,以 0.01Mol/L pH7.4PBS(0.14Mol/L NaCl) 洗脱,收集洗脱液即为纯化的 IgE 。
7. 浓缩、鉴定。