辛酸提取法纯化多克隆抗体
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该法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液中McAb。
【材料和试剂】
(1)正辛酸。
(2)60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液,PBS。
(3)透析袋。
(4)高速低温离心机。
【操作步骤】
(1)将待提取样品用60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液稀释3~4倍,调pH至4.5,对含脂质较高的标本可采用二氧化硅粉或玻璃纤维吸附法除去脂质。
(2)在室温下边搅拌边缓慢加入正辛酸,按每ml样品中加25μl,若样品体积小于5ml,则每ml样品内加入30μl正辛酸,搅拌30min。
(3)10 000×g离心30min,取上清液通过定性滤纸过滤,装人透析袋,用20倍体积的PBS,4℃透析过液,中间换液3~4次。
(4)然后每毫升混合液加0.27g硫酸铵,搅拌30min。
(5)以5000g离心15min,收集沉淀物,溶于少量PBS中,再以15000×g离心20min。上清液即为提取的Ig,其中大部分为IgG,约占90%,少量为IgA及IgM,回收率>80%。整个操作可在24h内完成。