辛酸提取法纯化多克隆抗体

互联网2013-09-06

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该法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液中McAb。

　　【材料和试剂】

　　（1）正辛酸。

　　（2）60mmol/L，pH4.0醋酸缓冲液，PBS。

　　（3）透析袋。

　　（4）高速低温离心机。

　　【操作步骤】

　　（1）将待提取样品用60mmol/L，pH4.0醋酸缓冲液稀释3～4倍，调pH至4.5，对含脂质较高的标本可采用二氧化硅粉或玻璃纤维吸附法除去脂质。

　　（2）在室温下边搅拌边缓慢加入正辛酸，按每ml样品中加25μl，若样品体积小于5ml，则每ml样品内加入30μl正辛酸，搅拌30min。

　　（3）10 000×g离心30min，取上清液通过定性滤纸过滤，装人透析袋，用20倍体积的PBS，4℃透析过液，中间换液3～4次。

　　（4）然后每毫升混合液加0.27g硫酸铵，搅拌30min。

　　（5）以5000g离心15min，收集沉淀物，溶于少量PBS中，再以15000×g离心20min。上清液即为提取的Ig，其中大部分为IgG，约占90％，少量为IgA及IgM，回收率>80％。整个操作可在24h内完成。