原理
由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗体就是多克隆抗体;除了抗原决定簇的多样性以外,同样一类抗原决定簇,也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。
材料与仪器
血清
DEAE纤维素 磷酸盐缓冲液
烧杯 布氏滤斗 滤纸
DEAE纤维素 磷酸盐缓冲液
烧杯 布氏滤斗 滤纸
步骤
1. 称取DEAE-纤维素(DE32或DE52)50 g,置于1 000 ml烧杯中,先以蒸馏水漂浮除去细颗粒,再经酸碱处理后,用0.01~0.05 mol/L,pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。
2. 将水分抽干,或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤,收集湿纤维素,以降低其离子强度。按1 ml血清加湿重5 g DEAE纤维素,经过充分搅拌,置4℃吸附1 h。上清液可再如此处理一次,即获得较纯的IgG。
2. 将水分抽干,或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤,收集湿纤维素,以降低其离子强度。按1 ml血清加湿重5 g DEAE纤维素,经过充分搅拌,置4℃吸附1 h。上清液可再如此处理一次,即获得较纯的IgG。
注意事项
准备前需要配好磷酸盐缓冲液, 并测定其PH值。
来源:丁香实验