多克隆抗体纯化

通常首次抗原剂量为50-100ug左右

一般而言，小鼠首次免疫剂量为每次50～400μg，大鼠为每次100μg～1mg，兔为每次200μg～1mg。加强免疫剂量为首次剂量的1/5～2/5。如要制备高度特异性的抗血清，可选用低剂量抗原短程免疫法；如欲获得高效价的抗血清，则宜采用大剂量抗原长程免疫法。

在多克隆抗体纯化中，抗原用量的确定通常需要优化，以确保抗原与抗体充分结合。以下是一般的操作步骤和建议：

1. 初始试验：首先，你可以进行一系列初始试验，尝试不同抗原用量以确定适当的浓度范围。通常，建议在最低浓度和最高浓度之间进行2倍的稀释序列。

2. 固相结合试验：准备一定量的固相（如NHS-activated Sepharose 4 Fast Flow），添加不同浓度的抗原，使其与固相结合。随后，通过洗涤步骤和洗脱步骤来评估抗原与固相的结合效果。使用特定的检测方法（如ELISA）来确定结合效果。

3. 优化抗原用量：根据初始试验的结果，选择抗原用量范围中的最佳浓度。通常，最佳抗原用量会产生最强的结合信号，同时避免过高的信号饱和。