多克隆抗体提取实验

实验分类：

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体。主要用于（1）批量提取多个抗体（2）为进一步验证抗体的作用进行基础操作。

来源：丁香实验

操作方法

批量提取法

1. 称取DEAE-纤维素(DE32或DE52)50 g，置于1 000 ml烧杯中，先以蒸馏水漂浮除去细颗粒，再经酸碱处理后，用0.01～0.05 mol/L，pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。 2. 将水分抽干，或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤，收集湿纤维素，以降低其离子强度。按1 ml血清加湿重5 g DEAE纤维素，经过充分搅拌，置4℃吸附1 h。上清液可再如此处理一次，

Tris-Cl离子交换层析法(Ion-exchange chromatography)

一、材料和试剂 1. DE32或DE52纤维素。 2. HCl；NaOH；0.01～0.05 mol/L，pH8.0 PB；0.01 mol/L，pH8.6 Tris-Cl；0.5 mol/L NaCl。 3. 待纯化标本：杂交瘤腹水或培养上清，免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。 4. 1.5x50 cm 层析柱；透析袋；紫外分光光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。二、操作步骤 1.

Tris-PO4 离子交换层析法

一、材料和试剂 1. DE32或DE52纤维素。 2. 待纯化标本：杂交瘤腹水或培养上清，免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。 3. 1.5x50 cm 层析柱；透析袋及其他透析和层析所需的试剂和器材。 4. 梯度洗脱液包括：0.005 mol/L，pH8.6 Tris-PO4 ；0.055 mol/L，pH6.0 Tris-PO4 ；0.5 mol/L，pH5.1 Tris-PO4 。二、