人脐带平滑肌细胞培养

材料：

新鲜脐带

方法：

冰冷无菌D-Hanks液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks液反复清洗8~10次，加入10倍体积无菌胶原酶消化液（1mg/mL)，室温消化30min，1000rpm离心5min，弃上清，加1mg/mL胰蛋白酶37℃消化20min，1000rpm离心5min，弃上清，再加入胰蛋白酶37℃消化20min，1000rpm离心5min，弃上清，加胶原酶（1mg/mL)弹性蛋白酶（0.5mg/mL)混合消化液37℃消化20min，1000rpm离心5min，弃消化液，再加混合消化液37℃消化20min，1000rpm离心5min，细胞加10%FBSDMEM培养基重悬，转入培养皿37℃5%CO2培养箱中培养即可。