材料与仪器
0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液
平滑肌培养液
Petri培养皿 手术刀和10号手术刀片 解剖剪 组织镊
平滑肌培养液
Petri培养皿 手术刀和10号手术刀片 解剖剪 组织镊
步骤
1. 从小牛取胸主动脉。
2. 将胸主动脉浸入 Hanks 液。
3. 分离细胞之前将动脉放在冰上。
4. 将动脉放入 150 mm × 25 mm Petri 培养皿。
5. 用解剖剪沿长轴剪开动脉。
6. 用手术刀片轻刮动脉内腔面，以除去内皮细胞。
7. 将动脉的中膜与内膜和外膜分离。
8. 将中膜切成约 1 cm2 大小的组织块。
9. 将中膜组织块放入 60 mm × 15 mm Petri 培养皿，内膜侧朝下。
10. 让组织块贴壁约 10 min。
11. 直接在组织块上注 1 ml SMCM（平滑肌培养液（smooth muscle cell medium，SMCM）：DMEM 添加 20 % FBS，100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 链霉素）。
12. 将组织块放入湿润的培养箱，在 37°C 和 10% CO2 条件下孵育。
13. 第 2 天加入 5 ml SMCM，注意勿让组织块去附着。
14. 将组织块继续孵育 10 d。此后，平滑肌细胞从组织块迁移出来，并变为单层。
15. 细胞生长接近形成单层时，用 0.25 % 胰蛋白酶和 EDTA 混合液传代。
2. 将胸主动脉浸入 Hanks 液。
3. 分离细胞之前将动脉放在冰上。
4. 将动脉放入 150 mm × 25 mm Petri 培养皿。
5. 用解剖剪沿长轴剪开动脉。
6. 用手术刀片轻刮动脉内腔面，以除去内皮细胞。
7. 将动脉的中膜与内膜和外膜分离。
8. 将中膜切成约 1 cm2 大小的组织块。
9. 将中膜组织块放入 60 mm × 15 mm Petri 培养皿，内膜侧朝下。
10. 让组织块贴壁约 10 min。
11. 直接在组织块上注 1 ml SMCM（平滑肌培养液（smooth muscle cell medium，SMCM）：DMEM 添加 20 % FBS，100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 链霉素）。
12. 将组织块放入湿润的培养箱，在 37°C 和 10% CO2 条件下孵育。
13. 第 2 天加入 5 ml SMCM，注意勿让组织块去附着。
14. 将组织块继续孵育 10 d。此后，平滑肌细胞从组织块迁移出来，并变为单层。
15. 细胞生长接近形成单层时，用 0.25 % 胰蛋白酶和 EDTA 混合液传代。
来源：丁香实验
