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细菌的分离与培养

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实验目的:

掌握在各种培养基上的接种方法并观察生长现象。

实验材料:

菌种、普通琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基、斜面培养基、接种环、接种针、酒精灯。

实验内容:

一、平板划线接种法(分离培养法)

原理:通过在平板上划线,将混杂的细菌在琼脂平板表面充分的分散开,使单个细菌能固定在一点上生长繁殖,形成单个菌落,以达到分离纯种的目的。若需从平板上获取纯种,则挑取一个单个菌落作纯培养。

用途: 分离出纯种细菌,以利作纯培养。

操作方法(三区划线法):

1、右手拿接种环,烧灼冷却后,取菌液一环。

2、左手抓握琼脂平板(让皿盖留于桌上),在酒精灯火焰左前上方,使平板面向火焰,以免空中杂菌落入,右手将已沾菌的接种环在琼脂表面密集而不重叠的来回划线,面积约占整个平板的1/5-1/6,此为第一区。划线时接种环与琼脂呈30-40度角轻轻接触,利用腕力滑动,切忌划破琼脂。

3、接种环上多余的细菌可烧灼(每划完一个区域是否需要烧灼灭菌视标本中含菌量多少而定),待冷后,在划线末端重复2-3根线后,再划下一区域(约占1/4面积),此为第二区。

4、第二区划完后可不烧灼接种环,用同样方法划第三区,划满整个平皿。

5、划线完毕,将平板扣入皿盖并作好标记,置37℃温箱孵育18-24小时观察琼脂表面菌落分布情况,注意是否分离出单个菌落,并记录菌落特征(如大小、形状、透明度、色素等)。

二、液体培养基接种法

用途:凡肉汤、蛋白胨水,各种单糖发酵均用此法接种。可以观察细菌不同的生长性状、生化特性以供鉴别之用。

操作方法:

右手执笔式握住接种环,灭菌冷却后取单个菌落。

1、 左手拇指、食指、中指托住液体培养基之下端,右手小指和无名指(或手掌)拔取 试管 塞,将管口移至火焰上旋转烧灼。

2、 将沾菌的接种环移入培养基管中,在液体偏少侧接近液面的管壁上轻轻研磨,沾取少许液体与之调和,使菌液混合于培养基中。

3、 管口通过火焰,塞好 试管 塞,将接种环灭菌后放下,经37℃温箱孵育18-24小时,取出观察生长情况。

三、半固体穿刺接种法

用途:观察细菌动力,保存 菌种 。

方法:

1、以无菌操作用接种针挑取单个菌落,立即垂直插入培养基中心至接近管底处循原路退回。

2、管口通过火焰,塞上棉塞,接种针灭菌后放下。试管置37℃温箱孵育18-24小时,取出后对光观察穿刺线上细菌生长情况:细菌有无向周围扩散生长,穿刺线是否清晰等。

四、斜面培养基接种法

用途:常用于扩大纯种细菌及实验室保存 菌种 。

操作方法:

1、 以无菌操作法用接种环挑取单个菌落,自斜面底向上划一直线,然后再从底向上轻轻来回作蜿蜒划线。

2、 管口通过火焰,塞上棉塞,接种环烧灼后方可放下。置37℃温箱孵育18-24小时,取出观察斜面上菌苔生长情况。


图6 斜面培养基接种法

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