【求助】关于长片段DNA ,PCR保真性问题的讨论。
丁香园论坛
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各位PCR高手:
本人新手,想要用PCR的方法,用高保真的DNA聚合酶扩增一段长度为2700bp的DNA,用于基因克隆。但本人担心PCR后产物片段可能突变。由于没有做过,我想实验前预先评估一下整个实验的风险。故向各为有经验人士请教,用高保真的DNA聚合酶扩增,能否保证2700bpDNA不突变?还有哪些可行的措施可以保证整个PCR过程的保真性?欢迎各位高手赐教。
本人新手,想要用PCR的方法,用高保真的DNA聚合酶扩增一段长度为2700bp的DNA,用于基因克隆。但本人担心PCR后产物片段可能突变。由于没有做过,我想实验前预先评估一下整个实验的风险。故向各为有经验人士请教,用高保真的DNA聚合酶扩增,能否保证2700bpDNA不突变?还有哪些可行的措施可以保证整个PCR过程的保真性?欢迎各位高手赐教。
循环数不宜太多,突变在PCR中是积累的。
虽然是用高保真的DNA聚合酶扩增,但还是有可能产生突变的。最后可以用测序来验证结果。
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