PCR问题，求助一下？

先确定你的primer正确，然后试着降低annealing temperature试试

挨着检查一下吧，模板，酶，引物，这些都有可能导致这样的结果。

原因可能有很多，可能是你模板问题，温度没设置好，尤其是退火温度，还有延伸时间，酶的活性，引物的设计，反应体系，最好设置阳性对照等等。

一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。

1.确认在样本中含有目标片段，cDNA这段序列和上下游引物的设计是匹配的，别弄反了
2.确认模板的质量。需要对模板进行OD260/280的检测，以确定模板的完整性和浓度是否符合要求。如果觉得不好弄，就多加点模板再试试。
3.引物本身的互补碱基有多少个？
4.梯度退火的范围是多少？通常Tm值要比引物公司给出的值低3-4度。我曾经最高尝试过70C开始的touchdown PCR，就是从70C开始退火，每2个循环退火温度降低1度，也可以增加扩增的特异性。

如果序列没有什么特别的，只有引物二聚体的话，通常要么是模板，要么是引物设计出问题了。因为体系中没有匹配的序列供引物去识别和结合，只能形成二聚体了。

换引物啊，可能是引物问题，也可能东西降解了