如何提高PCR扩增的保真性
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降低PCR扩增的错误率可以通过使用各种具有高保真性的DNA 聚合酶 来实现。
DNA 聚合酶 的保真度用错误率来表示，包括碱基错配率、PCR产物突变百分数等。
在目前已发现的所有耐高温DNA 聚合酶中，Pfu酶的出错率最低，保真度最高（见附表）。
除对酶进行选择，研究者也可通过优化反应条件来进一步减少PCR突变率，包括优化 缓冲液 组成、耐热聚合酶的浓度及对PCR循环条件进行优化等。
附表： DNA聚合酶的扩增错误率
|
耐热DNA聚合酶 |
碱基错配率 |
★ PCR 产物突变百分数（％） |
|
Pfu DNA Polymerase |
1.3×10 -6 |
2.6 |
|
Taq DNA Polymerase |
8.0×10 -6 |
16.0 |
|
Vent R ® DNA Polymerase |
2.8×10 -6 |
5.6 |
|
Deep Vent R ® DNA Polymerase |
2.7×10 -6 |
5.4 |
|
Tfl DNA Polymerase |
8.3×10 -6 |
16.6 |
|
Tbr DNA Polymerase |
9.5×10 -6 |
19.0 |
|
ΜlTma TM DNA Polymerase |
55.3×10 -6 |
110.6 |
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