PCR扩增不出DNA？

追忆似水流年S4UD

2021-10-21

求助，各位大神，PCR之前可以扩增出目的片段，但片段比我需要的片段大一些，如下图 img 但是我后面一直扩增不出DNA了，全都是引物二聚体，还是原来的反应体系，原来的扩增条件，也怀疑过是仪器的问题，换了仪器依旧扩增不出，也换了Taq酶，结果还是如此。 img 附反应体系，扩增条件。 img img 求求各位大神指点迷津

2 个回答

我的头痛不再痛

2021-10-21

有帮助

1、其实产物和marker比起来大小上有点偏差是很正常的，包括蛋白在内的分子标量，有时候不是那么准确，这个不必担心，只要差别不是很大就可以。完全可以通过测序去验证。 2、之前能扩增出来，后来就扩增不出来，相同的扩增条件和体系，那是否就是模板的问题呢？比如你使用了新的模板，这样就有可能是你模板的质量或浓度问题。

今天也要好好电泳

2021-10-21

有帮助

模板浓度过大吗？我之前尝试稀释模板重新扩增，就有条带了