各位分子生物学大神们，麻烦分析一下问题可以么，非常感谢

我的步骤是先加的25ul的MIX 再加的21ul的去离子水 再加的1ul的上游引物再加的iul的下游引物 最后加的干菌进行PCR扩增 但始终扩不出目的产物 我都从6月份做到了现在 一直没做出来 都快崩溃了 还要考研 各位大佬要是有什么好办法求帮个忙
图三是用的2%的胶 1XTBE Buffer
PCR的条件是 94度 5min 94度 30s 57度 40s 72度 90s (30 cycles) 72度 10min 4度 保存
图二是用的1.5%的胶 0.5XTBE Buffer
PCR的条件是 94度 3min 94度 30s 55度 30s 72度 60s (30 cycles) 72度 5min 4度 保存