PCR扩增标本的HLA-DR基因

互联网2010-12-02

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PCR 扩增标本的HLA-DR基因

（一）扩增引物

HLA-DRB1基因扩增引物为：5’-CCGGATCCTTCGTGTCCCCACAGCACG-3’

5’-TCGCCGCTGCACTGTGAAG-3’

（二）PCR扩增体系

（1） 1.0uM 扩增引物

（2） 300ng待测样本基因组DNA

（3） 2.0U Taq多聚酶

（1） 200uM 各种dNTP

（2）用1 X PCR缓冲液（10mM Tris-HCl，pH8.3，50mM KCl，1.5mM MgCl₂ ，0.01%明胶）调至总体积100ul，并用50ul矿物油覆盖，防止水分蒸发。

（三）PCR扩增

（1）采用下列PCR扩增条件进行扩增：

预变性：94℃，5分钟

变性： 94℃，30秒

退火： 55℃，50秒

延伸： 72℃，40秒

扩增循环数为33次

（2） PCR扩增完成后，取5ul进行琼脂糖凝胶电泳检查，上述引物扩增的产物长度为292bp。

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