台盼蓝染色法
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材料:
1. 显微镜、玻片、盖玻片、滴管;
2. 试剂:0.4%台盼蓝染液;
3. 台盼蓝(Trypan blue):0.4g;
4. 生理盐水:100ml;
操作步骤:
1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2. 用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4. 将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6. 染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9. 统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。
细胞活率(%)=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。
注意事项:
1. 染色时间不能太长,否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色,使监测结果偏低;
2. 另可结合细胞计数方法,同时进行细胞计数和活力检测。