台盼蓝（trypan blue）排斥实验

台盼蓝（trypan blue）排斥实验一、目的学习台盼蓝排斥实验的原理和方法二、概述台盼蓝又称锥蓝，是一种阴离子型染料，这种染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色，但死亡细胞的细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使死细胞着色呈蓝色。是最常用的检测细胞活率的方法。细胞活力常用百分比表示，活力的大小对试验结果有很大影响。细胞活力的测定有许多方法，最简便常用的方法是台盼蓝（trypan blue）染色法。三、材料1. 显微镜、玻片、盖玻片、滴管2. 试剂：0.4%台盼蓝染液：1) 台盼蓝（Trypan blue） 0.4g 2) 生理盐水 100ml四、操作步骤1、将待染色细胞稀释至所需浓度。（方法及浓度范围与细胞计数相同） 2、每0.1ml细胞悬夜约加新鲜配置的染液一小滴，室温下染3～5min 。3、染色过的细胞材料，取一滴细胞悬液置玻片上，加盖玻片后放在高倍镜下观察。4、死亡的细胞着浅蓝色并膨大，无光泽；活细胞不着色并保持正常形态，有光泽。计数100～200个白细胞。统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活力。 细胞活力（%）=未染色的细胞数/观察的细胞总数 × 100五、注意事项1. 染色时间不能太长，否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色，使检测结果偏低。2. 另可结合细胞计数方法，同时进行细胞计数和活力检测。