材料与仪器
滤纸 玻璃板 玻璃棒 InstaStain Blue Gel Stain Paper 微波炉 塑料容器
步骤
1.电泳结束后,在一塑料容器中倒入足够浸没凝胶的水,例如,一块典型的 mini 胶(8 cmXl0 cm 或 8 cmX8 cm) 需要 IOOml 水。将凝胶放入容器中,轻摇 5 min。
2.用水重复洗两次以上(洗涤的总时间是 l5 min)。
3.弃去水,加入足够浸没凝胶量的试剂 A,室温下摇动凝胶 1 〇 111^。
4.从试剂 A 中取出凝胶,放置到一块玻璃板上。注意保持凝胶湿。
5.将 InstaStamBlueGelStainPaper 放到凝胶上,注意蓝色面朝下。用玻璃棒碾平赶出气泡。
6.用试剂 A 湿润三张滤纸,将湿润的滤纸放置到 instastainBlue 凝胶染色纸上面。用玻璃棒碾平赶出气泡。I^
7.把第二块玻璃板放到滤纸上。
8.将凝胶/纸/玻璃板夹层放进微波炉,用「高」档加热至温热(约 8s)。勿让凝胶过热,胥则会粘住 InstaStainBlue 凝胶染色纸。
9.移去上层玻璃板、滤纸和 InstaStainBlue 凝胶染色纸,将凝胶放进装有足够浸没凝胶的试剂 A 的容器中。
实验提示:如果凝胶粘住了凝胶染色纸,将它们一起放入试剂 A 中,不断摇动直至纸能从胶上剥离下来,然后把凝胶转入新鲜的试剂 A 中。
10.室温摇动凝胶 Ih。
11.弃去试剂 A,室温下用水清洗凝胶至少 Ih 直到背景变得理想。这样,含有 20ng 蛋白量的条带就能显现。
这块凝胶能在水中保存过夜,而且灵敏度不会降低,条带的颜色也不会变浅。
来源:丁香实验