单向聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

一、灌制平板胶 1.清洗玻璃板。 a.将玻璃板放人 2%PCC-54 清洗液中浸泡 3?24 h。 b.自来水彻底冲洗玻璃板后，再用蒸馏水清洗一遍。 c.玻璃板用干净纸巾擦干后，再用浸过甲醇的 Kunwipes 纸巾擦拭，空气中晾干。 2.安装凝胶模具组件。 a.将间隔片放在两块玻璃板之间形成三明治模式，用夹子夹好。 b.调整玻璃板

1.电泳结束后，将凝胶置于盛有 CBR-250 的塑料容器中，容器中 CBR-250 的量要足够覆盖整块凝胶。例如，一块典型的 mini 胶（8 cmX10 cm 或 8 cmX8 cm) 需用 IOOml 的 CBR-250。 2.室温下摇动凝胶 5~20 min。 3.弃去用过的 CBR-250 染料。 4.加入适量的脱色液，用 Kimwipe 纸巾轻搅溶液以吸附多余的染料直至理想的背景

一、凝胶染色 1.电泳结束后，将凝胶置于盛有试剂 A 的微波炉专用塑料容器中，试剂 A 的量要足够覆盖整块凝胶。例如，一块典型的 mini 胶（8 cmX10 cm 或 8 cmX8 cm) 需用 IOOml 的试剂 A。 2.用微波炉的最大功率加热凝胶直至溶液沸腾（约需 2 min)。 3.室温轻轻摇动凝胶，使之冷却 5 min。 4.弃去用过的试剂 A

1.电泳结束后，在一塑料容器中倒入足够浸没凝胶的水，例如，一块典型的 mini 胶（8 cmXl0 cm 或 8 cmX8 cm) 需要 IOOml 水。将凝胶放入容器中，轻摇 5 min。 2.用水重复洗两次以上（洗涤的总时间是 l5 min)。 3.弃去水，加入足够浸没凝胶量的试剂 A，室温下摇动凝胶 1 〇 111^。 4.从试剂 A 中取出凝胶，放置到一块

1.电泳结束后，将凝胶置于盛有试剂 A 的塑料容器中，试剂 A 的量要足够覆盖整块凝胶。例如，一块典型的 mini 胶（8 cmXIOcm 或 8 cmX8 cm) 需用 IOOml 的试剂 A。 2.室温下摇动凝胶 30 min。 3.弃去使用后的试剂 A，加入足够覆盖凝胶量的 SYPRORuby 染料，用铝箔遮盖好容器，室温下摇动凝胶 90 mm 至过夜。 未使用过的 SYPRO Rub

1.电泳结束后，将凝胶置于盛有试剂 A 的塑料容器中，试剂 A 的量要足够覆盖整块凝股。例如，一’块典型的 mini 胶（8 cmXIOcm 或 8 cmX8 cm) 需用 50~IOOml 的试剂 A。 2.用铝箔遮盖好容器，避免凝胶暴露在强光下。 3.室温下摇动凝胶 60 min。 4.移出试剂 A，留待步骤5 中使用。往盛有凝胶的容器中加入适量的试剂 B，室

1.将目的蛋白和标准分子量蛋白上样到同一块 SDS-PAGE 平板凝胶中，按照方案 1 的步骤进行 SDS-PAGE。在同一块平板凝胶上进行目的蛋白和标准分子量蛋白的电泳，可以消除由于丙烯酰胺浓度和电泳条件不同而产生的差异。可以通过商业途径获得多种标准蛋白试剂盒，标准蛋白及其分子量的详细资料也可在 Weber 和 Osborn(1969)、Neville(1971) 以及 Hames(1990)

1.按照 蛋白质的SDS-PAGE实验 制备凝胶，但浓缩胶和分离胶用本文配方。 2.往上下缓冲液槽中注满 IXtricine 电泳缓冲液。 3.室温下将蛋白样品溶解在 50ul CTAB 上样缓冲液中，终浓度为 5 mg/ml。如果不考虑样品的生物学活性，可将其在有 2% 巯基乙醇存在下置沸水浴中加热 3 min。 4.将样品加人上样孔。 5.100V 开始浓缩胶部分的电泳，注意电泳是从阳

1.按以下配方制备凝胶混合物（15% 丙烯酰胺、2.5mol/L 尿素、O.9mol/L 醋酸，PH2.7)。 2.往微型胶模具中灌制凝胶。 3.在恒定的照明条件下光聚合 2 h。不需要做预电泳。 4.往缓冲液槽中注满缓冲液。 5.溶解蛋白样品到上样缓冲液中，使蛋白终浓度达 35 mg/ml。 6.将溶好的蛋白样品加至凝胶上样孔中。 7.开始电泳，由正极到负极。采用厂商推荐的最佳电压

1.按方案 1 制备不连续凝胶。 2.分别往电泳上槽和下槽中注入对应的电泳缓冲液。 3.按方案 1 的方法制备凝胶的蛋白质上样样品。 4.每块胶以恒流 25mA，从负极到正极开始电泳。 5.选用方案 2 或方案 7 中介绍的考马斯亮蓝或银染法使蛋白显现。

1.安装凝胶灌制模具、灌制凝胶、开始电泳，以及对凝胶进行的操作、保存、染色等步骤均与方案 1 中所述一致。 2.若要通过检测生物学活性来确定蛋白位置，则进行两组相同样品的电泳。一组染色，另一组检测活性。最常遇到的情况是检查胶中的酶促活性位置，即用相应的底物溶液清洗凝胶，在有酶促活性位置就会有有色产物出现。此外也可用 CBR-250 染色法使蛋白显色，见方案 2 或方案 3。