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酸-尿素连续 PAGE

相关实验:单向聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

最新修订时间:

材料与仪器

冷冻干燥后的蛋白样品或块状蛋白样品
丙烯酰胺 二苯基碘酰氯贮存 冰醋酸 亚甲基蓝储存液 槽缓冲液 上样缓冲液 对甲苯亚磺酸钠 尿素
光源

步骤

1.按以下配方制备凝胶混合物(15% 丙烯酰胺、2.5mol/L 尿素、O.9mol/L 醋酸,PH2.7)。


2.往微型胶模具中灌制凝胶。

3.在恒定的照明条件下光聚合 2 h。不需要做预电泳。

4.往缓冲液槽中注满缓冲液。

5.溶解蛋白样品到上样缓冲液中,使蛋白终浓度达 35 mg/ml。

6.将溶好的蛋白样品加至凝胶上样孔中。

7.开始电泳,由正极到负极。采用厂商推荐的最佳电压。例如,使用 Bio-RadMini-ProteannCellmini 胶时,采用 130V 电压。

8.待染料前沿到达凝胶底部时,关掉电源停止电泳。

来源:丁香实验

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