CTAB-PAGE实验

该方案由方案 蛋白质的SDS-PAGE实验 中介绍的标准 SDS-PAGE 衍变而来。虽然在进行变性凝胶电泳时多选用 SDS-PAGE, 但阴禽子去污剂 SDS 仍然存在一些局限。例如，SDS 在低温下会结晶，某些情况下还会使蛋白质聚集或沉淀，而且有些蛋白在 SDS 凝胶中不能很好地溶解或者出现异常的迁移现象。这些情况下，可选择采用阳离子去垢剂进行 PAGE。这里讲到的不连续、阳离子去垢剂 PAGE 方法参照了 Atkins 等（1992)。这个系统中使用的是阳离子去垢剂 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵），其浓缩胶以两性离子精氨酸（作为浓缩溶液）和 tricine[N-三（羟甲基）甲基甘氨酸] 为缓冲体系。如果样品没有经过煮沸和外加还原剂，一些由 CTAB 电泳系统分离的蛋白质仍保持其酶学活性。

冷冻干燥后的蛋白样品或块状蛋白样品
丙烯酰胺贮存液 CTAB 上样缓冲液 2-巯基乙醇 分离胶混合物 5 X tridne 电泳缓冲液
沸水浴装置

1.按照 蛋白质的SDS-PAGE实验 制备凝胶，但浓缩胶和分离胶用本文配方。

2.往上下缓冲液槽中注满 IXtricine 电泳缓冲液。

3.室温下将蛋白样品溶解在 50ul CTAB 上样缓冲液中，终浓度为 5 mg/ml。如果不考虑样品的生物学活性，可将其在有 2% 巯基乙醇存在下置沸水浴中加热 3 min。

4.将样品加人上样孔。

5.100V 开始浓缩胶部分的电泳，注意电泳是从阳极到阴极。

6.当样品迁移至分离胶时，将电压升至 150V。

7.当染料前沿到达凝胶底部时，关掉电源，停止电泳。