材料与仪器
蛋白溶液或块状细胞蛋白
丙烯酰胺 过硫酸铵 电泳缓冲液 5X样品缓冲液 分离胶缓冲液 浓缩胶缓冲液
微量注射器 移液器吸头或凝胶上样吸头
丙烯酰胺 过硫酸铵 电泳缓冲液 5X样品缓冲液 分离胶缓冲液 浓缩胶缓冲液
微量注射器 移液器吸头或凝胶上样吸头
步骤
1.安装凝胶灌制模具、灌制凝胶、开始电泳,以及对凝胶进行的操作、保存、染色等步骤均与方案 1 中所述一致。
2.若要通过检测生物学活性来确定蛋白位置,则进行两组相同样品的电泳。一组染色,另一组检测活性。最常遇到的情况是检查胶中的酶促活性位置,即用相应的底物溶液清洗凝胶,在有酶促活性位置就会有有色产物出现。此外也可用 CBR-250 染色法使蛋白显色,见方案 2 或方案 3。
2.若要通过检测生物学活性来确定蛋白位置,则进行两组相同样品的电泳。一组染色,另一组检测活性。最常遇到的情况是检查胶中的酶促活性位置,即用相应的底物溶液清洗凝胶,在有酶促活性位置就会有有色产物出现。此外也可用 CBR-250 染色法使蛋白显色,见方案 2 或方案 3。
来源:丁香实验