原理
Giemsa 染色是最常用的方法之一,它简便、快速,适用于多种细胞和染色体染色。
材料与仪器
Giemse 甘油 甲醇 Sorensen
滴管 玻璃片
滴管 玻璃片
步骤
1. 染液制备
(1)称Giemse粉0.5 g、甘油22 ml,在研钵内先用少量甘油与Giemsa充分混合,研磨至无颗粒;
(2)再将剩余甘油混在一起;56 ℃保温2 小时后,加入33 ml纯甲醇,保存于棕色瓶内。
2. 染色步骤(以盖片培养法或涂片法为例)
(1)用pH6.8~7.38的Sorensen缓冲液,按1:9 比例取Giemsa染液和Sorensen缓冲液混合配成染色液;
(2)细胞标本用甲醇固定10 分钟,或1:3醋酸/甲醇固定30 分钟,用滴管把染色液布满玻片上(注意不要有气泡,用染色缸染色亦可);
(3)染10~15 分钟后,用自来水冲去玻片上多余的染料,空气干燥、二甲苯透明、光学树脂胶封固。
3. 结果
胞核染成紫红色或蓝紫色,胞浆染成粉红色。
(1)称Giemse粉0.5 g、甘油22 ml,在研钵内先用少量甘油与Giemsa充分混合,研磨至无颗粒;
(2)再将剩余甘油混在一起;56 ℃保温2 小时后,加入33 ml纯甲醇,保存于棕色瓶内。
2. 染色步骤(以盖片培养法或涂片法为例)
(1)用pH6.8~7.38的Sorensen缓冲液,按1:9 比例取Giemsa染液和Sorensen缓冲液混合配成染色液;
(2)细胞标本用甲醇固定10 分钟,或1:3醋酸/甲醇固定30 分钟,用滴管把染色液布满玻片上(注意不要有气泡,用染色缸染色亦可);
(3)染10~15 分钟后,用自来水冲去玻片上多余的染料,空气干燥、二甲苯透明、光学树脂胶封固。
3. 结果
胞核染成紫红色或蓝紫色,胞浆染成粉红色。
注意事项
1. 染色液宜现用现配,保存时间最好不超过48 小时,旧染液染色效果不好。
2. Giemsa 对pH 极敏感,缓冲液pH 值要调准确,否则染色效果不好。
3. 用染色缸染色时,随染色时间的延长,在染液表面常形成一层氧化膜(发亮),这层氧化膜易附在片上形成污秽,且不易除掉。因此在用染色缸染色,尤其用的不是现配者时,染色前应先用小片滤纸刮除液面的氧化层再进行染色。
4. 染色完毕,应把标本浸入水中洗除染液,或用自来水直接冲掉多余染液。
2. Giemsa 对pH 极敏感,缓冲液pH 值要调准确,否则染色效果不好。
3. 用染色缸染色时,随染色时间的延长,在染液表面常形成一层氧化膜(发亮),这层氧化膜易附在片上形成污秽,且不易除掉。因此在用染色缸染色,尤其用的不是现配者时,染色前应先用小片滤纸刮除液面的氧化层再进行染色。
4. 染色完毕,应把标本浸入水中洗除染液,或用自来水直接冲掉多余染液。
来源:丁香实验