培养细胞的染色实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

培养细胞可用各种方法染色，有一般和特殊之分；一般染色为观察细胞一般形态之用，特殊染色为用于观察细胞的特殊成分和结构的染色方法。内容来源：组织培养和分子细胞学技术。（北京出版社）

来源：丁香实验

操作方法

Giemsa染色法

1. 染液制备（1）称Giemse粉0.5 g、甘油22 ml，在研钵内先用少量甘油与Giemsa充分混合，研磨至无颗粒；（2）再将剩余甘油混在一起；56 ℃保温2 小时后，加入33 ml纯甲醇，保存于棕色瓶内。 2. 染色步骤（以盖片培养法或涂片法为例）（1）用pH6.8~7.38的Sorensen缓冲液，按1：9 比例取Giemsa染液和Sorensen缓

苏木精伊红染色法

1. 37 ℃温BSS漂洗3 次，每次20 秒~1 分钟；中性福尔马林固定30 分钟； 2. 先用蒸馏水漂洗1 次；再用蒸馏水稀释的苏木精液（1/20）染10 分钟； 3. 自来水洗、置入1 %NaHCO3液中漂洗至蓝紫色； 4. 伊红水溶液中染30 秒~1 分钟； 5. 蒸馏水洗，迅速通过丙酮2 次，每次3~5 分钟； 6. 通过2：1 丙酮/二甲苯3 次

Feulgen染色法

1. 单层盖片法培养细胞，Carnoy或醋酸/甲醇固定20 分钟； 2. 投入1 N HCl 1~2 分钟（室温）； 3. 投入1 N HCl 8~10 分钟（60 ℃）； 4. 投入Schiff剂中染色1~5 小时（10 ℃暗处）； 5. 漂洗液洗2 次，每次2 分钟； 6. 蒸馏水漂洗2 次，每次3 分钟； 7. 脱水 75 %→100 %

吖啶橙染色荧光观察法

1. 用盖片单层培养细胞，从瓶中取出后速用温Hanks液漂洗3~5 秒，以去除培养基中血清（于此步可进行直接染色观察活细胞）； 2. 投入95 %酒精或醋酸/甲醇固定15~30 分钟，微干（盖片边缘接触滤纸）； 3. 1 %醋酸作用30 秒； 4. 1×10－4 吖啶橙染30 秒或1 分钟； 5. 0.1 M CaCl2处理30 秒~2 分钟； 6. PBS