原理
吖啶橙（Acridine Oringe：AO）是一种常用荧光染料，用于直接染色观察活细胞或固定染色观察细胞均可。吖啶橙对DNA和RNA都能染色，快速、简便和有一定的特异性。吖啶橙对活细胞毒性小，配成2×10－4～1×10－4 可用于直接染色观察法更好。
材料与仪器
细胞
酒精 PBS CaCl2 醋酸
酒精 PBS CaCl2 醋酸
步骤
1. 用盖片单层培养细胞，从瓶中取出后速用温Hanks液漂洗3~5 秒，以去除培养基中血清（于此步可进行直接染色观察活细胞）；
2. 投入95 %酒精或醋酸/甲醇固定15~30 分钟，微干（盖片边缘接触滤纸）；
3. 1 %醋酸作用30 秒；
4. 1×10－4 吖啶橙染30 秒或1 分钟；
5. 0.1 M CaCl2处理30 秒~2 分钟；
6. PBS漂洗3 次，每次数秒；
7. PBS封片，荧光显微镜下直接观察并拍照。
2. 投入95 %酒精或醋酸/甲醇固定15~30 分钟，微干（盖片边缘接触滤纸）；
3. 1 %醋酸作用30 秒；
4. 1×10－4 吖啶橙染30 秒或1 分钟；
5. 0.1 M CaCl2处理30 秒~2 分钟；
6. PBS漂洗3 次，每次数秒；
7. PBS封片，荧光显微镜下直接观察并拍照。
注意事项
1. 观察中应随时填加PBS以避免标本干涸：如用油浸镜观察，需再覆以大盖片盖在附有细胞盖片上（细胞面朝上），用无荧光性油浸观察。
2. 标本在95 %酒精中能保存数日后仍可观察，如退色，再用AO染色。镜下观察，DNA呈翠绿色，RNA呈火红色。
2. 标本在95 %酒精中能保存数日后仍可观察，如退色，再用AO染色。镜下观察，DNA呈翠绿色，RNA呈火红色。
来源：丁香实验
