紧急！！！关于双重PCR的扩增效率
丁香园论坛
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有谁能帮我解决相对定量时内参和目标产物的扩增效率问题？
我用的反应体系为50ul：
１０＊PCR buffer 1 ＊(终浓度）
２mmol/l dNTP 0.2mmol/l每种
TaQnase 5U/IU 1U/50ul
25mmol/l Mgcl2 2.5mmol/l
intel reference Primer 1F 1umol/l
1R 1umol/l
MGB probe 0.25umol/l
target Primer 1F 1umol/l
1R 1umol/l
MGB probe 0.25umol/l
Template 0.05ng--0.005ng
循环条件:94 5min 1cycle -------- 95 30sec 60 30sec 45cycle
在内参和目标基因初浓度一样的情况下,如何避免竞争抑制使两个基因的扩增效率一致且相对比值接近1呢?
我用的反应体系为50ul：
１０＊PCR buffer 1 ＊(终浓度）
２mmol/l dNTP 0.2mmol/l每种
TaQnase 5U/IU 1U/50ul
25mmol/l Mgcl2 2.5mmol/l
intel reference Primer 1F 1umol/l
1R 1umol/l
MGB probe 0.25umol/l
target Primer 1F 1umol/l
1R 1umol/l
MGB probe 0.25umol/l
Template 0.05ng--0.005ng
循环条件:94 5min 1cycle -------- 95 30sec 60 30sec 45cycle
在内参和目标基因初浓度一样的情况下,如何避免竞争抑制使两个基因的扩增效率一致且相对比值接近1呢?
