酶促生物素标记cRNA探针的应用
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酶促生物素标记cRNA探针基本方法和放射性标记cRNA探针同,所不同的是探针浓度为2.5μg/μl。显示探针反应步骤如下。
(1)用PBS冲洗粘附有切片的载片2×3min。根据情况也可用漂洗法。
(2)将载片浸入0.3%H2O2在PBS或甲醇内30min以封闭内源性过氧化物酶。
(3)PBS冲洗2×3min,用吸水纸拭干切片周围的水份,加入小鼠抗生物素血清1:100和PBS含正常羊血清(1:30),室温1h,或4℃过夜。
(4)PBS彻底冲洗。
(5)载片加生物素化抗小鼠IgG(1:100)30min室温。
(6)PBS彻底冲洗。
(7)应用ABC复合物与等量的1%牛血清白蛋白-PBS液混合孵育1h,室温。
(8)PBS彻底冲洗。
(9)将切片覆以新鲜配制的0.025贐溶液,0.02%H2O2,孵育3~15min。
(10)水洗,复染,脱水,透明和以甘油/PBS或DPX封固。如需要可用银染,多层ABC或PAP法加强染色效果。
(1)用PBS冲洗粘附有切片的载片2×3min。根据情况也可用漂洗法。
(2)将载片浸入0.3%H2O2在PBS或甲醇内30min以封闭内源性过氧化物酶。
(3)PBS冲洗2×3min,用吸水纸拭干切片周围的水份,加入小鼠抗生物素血清1:100和PBS含正常羊血清(1:30),室温1h,或4℃过夜。
(4)PBS彻底冲洗。
(5)载片加生物素化抗小鼠IgG(1:100)30min室温。
(6)PBS彻底冲洗。
(7)应用ABC复合物与等量的1%牛血清白蛋白-PBS液混合孵育1h,室温。
(8)PBS彻底冲洗。
(9)将切片覆以新鲜配制的0.025贐溶液,0.02%H2O2,孵育3~15min。
(10)水洗,复染,脱水,透明和以甘油/PBS或DPX封固。如需要可用银染,多层ABC或PAP法加强染色效果。