双标记探针QPCR问题

出现非特异扩增或引物二聚体：反应体系内模板浓度太高以及模板核酸质量较差，可能导致出现抑制 PCR 反应的现象。在绝对定量时表现扩增效率大于110%。解决方案：去除模板浓度最高的反应孔并重新分析标准曲线；对目的基因做标准曲线，一般用质粒做梯度稀释，或用 PCR 产物做梯度稀释，然后做定量扩增，通过曲线评估反应效率。绝对定量有效的扩增效率在 90%-110%；重新纯化模板，去除模板中存在的潜在抑制物。

可能是你FAM信号的接收器有问题了，因为你vic的结果正常，说明仪器基本正常，但是FAM的信号有改变，说明是和fam相关的东西有问题了。

一是扩增信号太弱，经系统矫正后，就产生这样抖啊抖的线，小编建议大家提高模板浓度重复实验。二是仪器本身的问题，可能在扩增过程中仪器