免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation)：Fab片段的制备方法

利用胃蛋白酶分解 IgG ，将抗体断链为 Fab 和 Fc 片段。具体操作方法如下：

1 ．将 IgG 粉末 100mg ，溶于 2ml0.10Mol/L pH4.0 醋酸缓冲液。溶液稍成白浊， 30 ℃ ，保温 10min 。

2 ．取结晶胃蛋白酶 1.50mg ，溶于 1.50ml 0.10Mol/L pH4.0 醋酸缓冲液，加入上述溶液中，于 30 ℃ 作用 16h 。

3 ．用 0.10Mol/L pH8.0 PBS 透析一夜。

4 ．加入硫醇使成 0.10mol/L ，在室温下搅拌 30min 。

5 ．加入 1Mol/L 的碘乙酰胺（ Indoacetamide ）使成为 0.10Mol/L ，室温下搅拌 1h 。

6 ．用 0.01Mol/L PBS 1 000ml 透析过夜， 3 000r/min ，离心 30min ，去沉淀。

7 ．以上清过 SephadexG100(40cm × 2.0cm ) 以 0.10Mol/L PBS 洗脱。

8 ．以每管 6ml 收集，约在第 8 管开始， Fab 片段被洗脱。

9 ．测 OD_280nm ，将 Fab 管合并，浓缩、冻干。

10 ．如制备 F(ab)₂ ，上述 4 ～ 6 步骤则可以省略。