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高 GC 含量片段的 PCR 扩增实验

相关实验:高 GC 含量片段的 PCR 扩增实验

最新修订时间:

材料与仪器

甜菜碱 dNTP 溶液 二甲基亚砜 四甲基砜 Taq 酶和酶缓冲引物
PCR 仪

步骤

一、材料

1. 试剂

甜菜碱(Sigma 公司)

dNTP 溶液(含四种 dNTP, 每种 25 mmol/L)

二甲基亚砜(DMSO)(Sigma 公司)

四甲基砜(Sigma 公司)

2. 酶和酶缓冲液

Taq 酶

Taq 酶缓冲液(Taq 酶制造商提供)

3. 核酸和寡核苷酸

人类基因组 DNA,每个反应中 20ng,

hRF3(hGSPTl) 引物:hRF3f   CCGC/CTCT/GTCG/TCGT/CGC

                                   hRF3r   CCGC/GCTG/AGGT/TCTC/CC

Klotho 外显子 la 引物:klolaf   CTCG/CAGG/TAAT/TATT/GCCAG

                                     klolar   GATG/GACG/CACC/CTTG

Klotho 外显子 lc 引物:klolcf   GTGC/AGCC/CGTG/GTCAC

                                   klolcr   GACT/CAGT/TCCC/ACAC/TTC

4. 设备

PCR 仪

5. 其他

琼脂糖凝肢电泳所需设备和试剂

二、方法

1. 在灭菌的 0.2 ml 的 PCR 管中加入下列试剂。

基因组 DNA                                20ng

引物(每种)                             15pmol

Taq 酶                                         0.5U

10 x buffer                                  2.5ul

dNTP 溶液(含四种 dNTP)         250umol/L

加 H20 到                                    25ul

根据处理条件的不同,分别包含 DMSO(5%)、甜菜碱(lmol/L)、甜菜碱(2mol/L)、甜菜碱(lmol/L) 和 DMS0(5%)、甜菜碱(2mol/L) 和 DMS0(5%)、四甲基砜(0.4mol/L),对照不加任何其他试剂。

2. 采用下列程序 A 或 B 运行 30 个循环。

来源:丁香实验

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