免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation)：连续提取免疫球蛋白法

（一）试剂及配制

1 ．饱和硫酸铵液

2 ．各种磷酸盐缓冲液

⑴ 0.2mol/L 原液

A 液： 0.20Mol/L NaH₂ PO₄ 液

NaH₂ PO₄ · H₂ O 31.20g

H₂ O 1 000ml

B 液： 0.20Mol/L Na₂ HPO₄ 液

Na₂ HPO₄ · 12H₂ O 71.7g

H₂ O 1 000ml

⑵ 0.10Mol/L pH8.0PB 液
A 液： 53ml

B 液： 947ml

H₂ O 加至 2 000ml

⑶ 0.005Mol/L pH8.0 PB 液

取 0.10Mol/L pH8.0 PB 液 100ml ，加 H₂ O 至 2 000ml

⑷ 0.025 Mol/L pH8.0 PB 液

取 0.10Mol/L pH8.0 PB 液 500ml ，加水至 2 000ml 。

⑸ 0.035 Mol/L pH8.0 PB 液

取 0.10.1 Mol/L pH8.0 PB 液 700ml ，加水至 2 000ml 。

⑹ 0.10Mol/L pH5.8PB 液

A ： 920ml

B ： 80ml

H₂ O 加至 2 000ml

⑺ 0.40Mol/L pH5.2pB 液

a 液 .0.40Mol/L NaH₂ PO₄ 液

NaH₂ PO₄ · 2H₂ O 62.40g

H₂ O 加至 1 000ml

B 液 .0.40Mol/L Na₂ HPO₄ 液

Na₂ HPO₄ · 12H₂ O 143.4g

H₂ O 加至 1 000ml

取 a 液 960ml

b 液 40ml

混合即可。

⑻ 0.01 Mol/L pH8.0PBS 液

取 0.10Mol/L pH8.0 PB 液 100ml

NaCl 8.20g

H₂ O 加至 1 000ml

3 ． DEAE- 纤维素 ( 细粒级 )

4 ． SephadexG₂₀₀

 

 

（二）操作方法

1 ．取一定量的血清，加等量的生理盐水，然后逐渐滴加饱和硫酸铵溶液，使成 40 ％的饱和度 , 静置 30min 。

2 ． 10 000r/min 离心 10min ，去上清。

3 ．加入一定量的生理盐水，使沉淀溶解，再加入饱和硫酸铵溶液，使成 40 ％饱和度。 10 000r/min 离心 10min ，去上清。

4 ．再重复步骤 3 一次。

5 ．将沉淀以少量生理盐水溶解，透析，除盐浓缩。

6 ．制备 DEAE- 纤维素柱，以 0.005Mol/L pH8.0PB 液平衡。

同时制备 SephadexG₂₀₀ 凝胶柱，以 0.01Mol/L pH8.0PBS 液平衡并进行洗脱。

7 ．以 0.005Mol/L pH8.0PB 液洗脱，得蛋白液为 IgG 。

7． 以 0.025 Mol/L pH8.0PB 液洗脱，得蛋白主要是 IgE ，再过 SephadexG₂₀₀ 凝胶柱，收集第一峰即为纯 IgE 。

8． 以 0.035 Mol/L pH8.0PB 液洗脱，得蛋白主要是 IgA ，再过 SephadexG₂₀₀ 凝胶柱，收集第一峰即为纯 IgA 。

10 ．以 0.10Mol/L pH5.8PB 液洗脱，洗脱液主要有 IgM 、 IgG 及白蛋白的混杂物。

11 ．以 0.40Mol/L pH5.2PB 液洗脱，得蛋白液主要是 IgM 。过 SephadexG₂₀₀ ，收 集第二峰即为纯 IgM 。