在免疫应答的过程中，B 细胞接受不同抗原刺激后，可转换表达不同的重链恒定区基因，改变所产生的免疫球蛋白分子（immunoglobulin，Ig）的类型。LPS 可刺激鼠脾 B 细胞发生 IgG2b 和 IgG3 的类别转换。细胞因子能诱导 Ig 向特定的类别发生转换，如 IL-4 和 LPS 共同活化 B 细胞可诱导鼠发生 IgG1 和 IgE 的类别转换，人发生 IgG4 和 IgE 的类别转换。ELISA 的方法可用于检测细胞培养上清中分泌的抗体类别，ELISPOT 方法可以用来检测分泌相应类别抗体的细胞数量，流式细胞术可以检测单个细胞表达相应类别抗体的状况。
免疫球蛋白类别转换的诱导和检测的基本原理是 LPS 可刺激鼠脾 B 细胞发生 IgG2b 和 IgG3 的类别转换。细胞因子能诱导 Ig 向特定的类别发生转换，如 IL-4 和 LPS 共同活化 B 细胞可诱导鼠发生 IgG1 和 IgE 的类别转换，人发生 IgG4 和 IgE 的类别转换。ELISA 的方法可用于检测细胞培养上清中分泌的抗体类别，ELISPOT 方法可以用来检测分泌相应类别抗体的细胞数量，流式细胞术可以检测单个细胞表达相应类别抗体的状况。
免疫球蛋白类别转换的诱导和检测的基本过程可分为以下几步：
（1）细胞培养条件的选择
1）LPS（40 μg／mL ），诱导 IgG2b 和 IgG3 的类别转换。
2）LPS（40 μg／mL ）＋重组 IL-4（5～20 ng／mL），诱导 IgG1 和 IgE 的类别转换。
3）抗 CD40 抗体／CD40L（10 μg／mL ），诱导 IgG2b 和 IgG3 的类别转换。
4）抗 CD40 抗体／CD40L（10 μg／mL ）＋重组 IL-21，诱导 IgG1 和 IgG3 的类别转换。
5）重组 IL-10（10 ng ／mL ）＋重组 TGFβ（2 ng／mL ），诱导初始 B 细胞分泌 IgG（主要是 IgG1 和 IgG3）以及 IgA（主要是 IgA1 和 IgA2）。
（2）ELISA 法检测 B 细胞分泌免疫球蛋白的类别
1）细胞准备：分离人 PBMC 或者小鼠脾脏单个核细胞，纯化 B 细胞。
2）细胞培养：用 RPMI 1640 培养液调整细胞浓度为 2x10／mL，选取合适的培养条件刺激细胞，取 200 μl 加入 96 孔圆底培养板，每个条件 3 个复孔，37 ℃ 、5％CO2 培养箱中孵育 2～7 天，收集上清，用 ELISA 法检测不同免疫蛋白的含量。
3）ELISA 法检测 Ig。
（3）ELISPOT 法检测 B 细胞分泌免疫球蛋白的类别
1）细胞准备：分离人 PBMC 或者小鼠脾脏单个核细胞，纯化 B 细胞。
2）包被捕获抗体：用无菌 PBS 稀释捕获抗体，取 100 μl 于 PVDF96 孔板中，4 ℃ 孵育过夜。
3）封闭：扣弃液体，用无菌 PBS 洗涤 PVDF 96 孔板，350 μl／孔／次，扣弃液体，加入封闭液（含有 1％BSA、5％ 蔗糖的 PBS），200 μl／孔，室温静止 2 小时。
4）细胞培养：用 RPMI 1640 培养液调整细胞浓度为 2x10／mL ，选取合适的培养条件刺激细胞，扣弃液体，取 100 μl 加入 PVDF96 孔板中，每个条件设 3 个复孔，37 ℃ 、5％CO2 培养箱中孵育 16～20 小时。
5）加检测抗体：弃去培养液，用含 0.05％Tween20 的 PBS 洗涤 4 次，350 μl ／孔／次，扣弃液体，用封闭液稀释检测抗体，100 μl ／孔，4 ℃ 中孵育过夜。
6）显色：弃去液体，用含 0.05％Tween20 的 PBS 洗涤 4 次，350 μl ／孔／次，扣弃液体，加显色液，100 μl ／孔，室温显色 10 分钟。
7）读取数据：显色结束后，扣弃显色液，用 ddH，2O 洗涤 3／次，晾干板后，用 CLT 读板仪读取数据。
（4）FACS 法检测 B 细胞分泌免疫球蛋白的类别
1）细胞准备：分离人 PBMC 或者小鼠脾脏单个核细胞，纯化 B 细胞。
2）细胞培养：用 RPMI 1640 培养液调整细胞浓度为 2x10／mL，选取合适的培养条件刺激细胞，取 200 μl 加入 96 孔圆底培养板，每个条件 3 个复孔，37 ℃ 、5％CO2 培养箱中孵育 3～4 天。
3）smlg 的染色：细胞培养结束后，用染色缓冲液洗涤细胞 2 次，在用荧光素标记抗 Ig 抗体标记前，用 100 μl 含有 50 μg／mL 抗人／鼠 FcYR IIb 单克隆抗体的 PBS／BSA 重悬，4 ℃ 孵育 15 分钟，以除去非特异性染色；用荧光素标记的抗 Ig 抗体和其他表面分子抗体（如 CD19、CD25、CD5 等）标记细胞，4 ℃ 孵育 30 分钟。
4）Ig 的胞内染色：细胞培养结束后，用染色缓冲液洗涤细胞 2 次，再用 PBS 洗涤细胞 1 次，用 PBS 重悬细胞浓度为 2x10／mL，加甲醇／PBS 固定细胞（终浓度为 2％），室温固定 20 分钟；用染色缓冲液洗涤细胞 1 次，加破膜液重悬细胞，4℃ 破膜 2 小时／过夜；用荧光素标记的抗 Ig 抗体和其他表面分子抗体（如 CD19、CD25、CD5 等）标记细胞，4 ℃ 孵育 30 分钟。
5）流式细胞仪检测：孵育结束后，用 1 mL 染色缓冲液洗涤细胞 1 次，用 200 μlPBS／BSA 重悬细胞，用流式细胞仪检测并分析数据。
