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Fab片段的制备方法

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利用胃蛋白酶分解IgG,将抗体断链为Fab和Fc片段。具体操作方法如下:

1.将IgG粉末100mg,溶于2ml0.10Mol/L pH4.0醋酸缓冲液。溶液稍成白浊,30℃,保温10min。

2.取结晶胃蛋白酶1.50mg,溶于1.50ml 0.10Mol/L pH4.0醋酸缓冲液,加入上述溶液中,于30℃作用16h。

3.用0.10Mol/L pH8.0 PBS 透析一夜。

4.加入硫醇使成0.10mol/L,在室温下搅拌30min。

5.加入1Mol/L的碘乙酰胺(Indoacetamide)使成为0.10Mol/L,室温下搅拌1h。

6.用0.01Mol/L PBS 1 000ml透析过夜,3 000r/min,离心30min,去沉淀。

7.以上清过SephadexG100(40cm×2.0cm)以0.10Mol/L PBS洗脱。

8.以每管6ml收集,约在第8管开始,Fab片段被洗脱。

9.测OD280nm,将Fab管合并,浓缩、冻干。

10.如制备F(ab)2,上述4~6步骤则可以省略。
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