正常兔食管上皮细胞培养
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实验材料:
1. 大兔的正常食管组织
2. 6孔培养板:用多聚赖氨酸4℃包被过夜
3. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素,pH7.4
4. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪,眼科镊
实验方法:
1. 处死大兔,取正常食管组织放入含双抗的PBS(pH=7.2)中反复清洗3次,以洗去组织表面的血丝及粘液;
2. 小心的用眼科剪镊将食管黏膜与黏膜下组织分离;
3. 分离出的粘膜组织用含双抗的PBS(pH=7.2)反复冲洗若干次;
4. 将清洗后食管黏膜组织剪成1mm3 左右大小的组织块;
5. 再次用含双抗的PBS(pH=7.2)反复清洗,直至清洗液清亮为止;
6. 将黏膜组织块按1块/cm2 的密度接种于6孔培养板中,上皮面朝下;
7. 将贴满组织块的培养板室温放置5~10分钟,待组织块贴壁后,转入37℃、5%CO2 的培养箱中静置培养。
8. 静置2h左右,待组织块基本不会浮起后,加入0.5-1ml培养液,置于37℃、5%CO2 的培养箱中继续培养。3-4天后有上皮细胞从组织边缘爬出,7天左右铺满板面。