正常人食管黏膜上皮细胞培养

实验材料：

1. 一般采用活检时获得的正常食管黏膜组织

2. 不含Ca²⁺ 和Mg²⁺ 的1×HBSS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和1.5g/L庆大霉素，pH7.4

3. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊

4. 离心管（15ml、50ml）

实验方法：

1. 食管黏膜组织放入HBSS中，在解剖显微镜下分离黏膜与黏膜下组织，用HBSS冲洗2-3次，将黏膜剪成约1mm³ 大小的组织块。

2. 将植块放入培养皿中，上皮面朝下；也可在培养皿内放入盖玻片，将组织块放在盖玻片上培养。

3. 当组织块贴壁后，加入适量培养液，培养液的量为能湿润组织块但不使组织块浮起为宜，在37℃、5%CO₂ 培养箱内静置培养。

4. 组织块贴壁1-3d后，补充培养液。以后每隔2-3d换液1次。

5. 植块培养3d后，细胞从植块边缘迁出。1周后，细胞向外迁移扩展，并逐渐分化，细胞的形态逐渐趋向正常食管黏膜上皮细胞的形态学特征。靠近植块的细胞体积小，类似基底细胞。外侧的细胞扁平，为分化的上皮细胞。2周后，细胞开始出现凋亡形态。3周后，近侧细胞减少，甚至消失。剩余的大部分细胞呈分化状态。