正常人支气管上皮细胞培养

实验材料：

1. 手术切除的含支气管的正常肺组织

2. 胰蛋白酶/EDTA液：0.05%胰蛋白酶，0.5mmol/L EDTA

3. 6孔培养板：用多聚赖氨酸包被

4. 不含Ca2+ 和Mg2+的1×PBS（pH=7.2），添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.4

5. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊

6. 离心管（15ml、50ml）

实验方法：

1. 将分离的两片肺叶组织用含双抗的1×PBS（pH=7.2）反复清洗几次；

2. 小心的用眼科剪将肺叶中的白色支气管组织剪下；

3. 再用含双抗的1×PBS（pH=7.2）反复冲洗若干次；

4. 将取下的支气管组织剪成1mm3 左右大小的组织块；

5. 用含双抗的1×PBS（pH=7.2）反复清洗，直至清洗液清亮为止；

6. 将组织块转入15ml离心管中，200rpm/min离心2min ，离心后倾去1×PBS（pH=7.2）；

7. 加入组织块4-5倍体积的胰酶，37℃水浴中消化30min，不时震荡；

8. 消化完成后，200rpm/min离心2min，小心倾去消化液，再加入组织块4-5倍体积胶原酶Ⅱ，37℃水浴中消化1h，不时震荡；

9. 消化完成后震荡离心管3次，之后静置5min，待较大的组织块沉降至管底后，小心吸出上层悬液（如吸出的悬液中絮状或块状的组织较多，可考虑过200目网筛去除），转入另一离心管中；

10. 1000rpm/min离心5min，倾去上层液体，加入培养基重悬细胞，转入6孔板中，置于37℃、5%CO2 的培养箱中培养。