正常人组织源性鼻咽上皮细胞的培养

实验材料：

1. 一般来自鼻咽癌活检组织或引产胚胎的鼻咽组织；

2. 不含Ca²⁺ 和Mg²⁺ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；

3. 培养基：可使用ROMI1640培养液，添加20%胎牛血清、5μg/ml胰岛素、2.7×10^{<font>-7</font>} mol/L氢化可的松。也可用DMEM培养液；

4. 低血清培养液与无血清培养液：基础培养液均为DMEM/F12（1:1，V/V）混合液。配置时，添加1.2g/L NaHCO_{<font>3</font>} 及15 mmol/L HEPES。低血清培养液是在基础培养液中再加入5μg/ml胰岛素、5ng/ml表皮生长因子、0.3mg/ml谷氨酰胺、100 IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素、5×10^{<font>-7<span> </span></font>} mol/L氢化可的松以及1.25%胎牛血清。若去掉低血清培养液中的胎牛血清，再加1mg/ml牛血清白蛋白及10μg/ml转铁蛋白，即为无血清培养液；

5. 消化液：0.02%EDTA-0.25%胰蛋白酶溶液，用D-Hanks液配制；

实验方法：

1. 取胚龄4—6个月水囊引产的胚胎，在无菌条件下分离鼻咽粘膜。若取材于鼻咽癌活检组织，则须将组织置于含高浓度抗生素（青霉素500 IU/ml、链霉素500μg/ml）的Hanks液中，在4℃下处理1小时；

2. 用Hanks液（含青霉素100 IU/ml、链霉素100μg/ml）漂洗2次，除去血块；

3. 将所取材料剪成0.5—1mm^{<font>3</font>} 的碎片，再用Hanks液充分漂洗；

4. 将植块种植到培养瓶内作干贴壁。翻转培养瓶，在瓶中加入2mlRPMI 1640培养液，在37℃培养箱中静置数小时；

5. 待植块牢固贴壁后，轻轻翻转培养瓶，使培养液均匀覆盖住植块。在37℃、5%CO₂ 的培养箱中继续培养； 培养24小时后换液，去除未贴壁细胞后继续培养，以后每周换液2—3次；

6. 3天后，去除未贴壁的植块。每3天换半量培养液。