免疫酶标技术
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免疫酶标技术
1） 直接法
1． 标本固定。
2． PBS 洗涤 2 × 3 分钟。
3． 1 ％ H2 O2 （或 1 ％ H2 O2 甲醇）抑制内源性过氧化物，室温 10 ～ 20 分钟。
4． 正常血清（ 1 ： 10 ）孵育，室温 20 分钟。
5． 滴加酶标记的抗体 37 ℃ 1 小时或 4 ℃过夜。
6． PBS 洗涤 3 × 3 分钟。
7． DAB ＋ H2 O2 显色 5 ～ 10 分钟，镜下控制染色结果。 DAB ＋ H2 O2 应用前 15 分钟配制。
8． 充分水洗后，复染、脱水、透明、封片、镜检。
2） 间接法
1． 标本固定。
2． PBS 洗涤 2 × 3 分钟。
3． 1 ％ H2 O2 （或 1 ％ H2 O2 甲醇）抑制内源性过氧化物，室温 10 ～ 20 分钟。
4． 正常血清（ 1 ： 10 ）孵育，室温 20 分钟。
5． 滴加第一抗体， 37 ℃ 1 小时或 4 ℃过夜。
6． PBS 洗涤 3 × 3 分钟。
7． 滴加酶标二抗，室温 1 小时。
8． PBS 洗涤 3 × 3 分钟。
9． 0.04 ％ DAB ＋ 0.03 ％ H2 O2 显色 5 ～ 10 分钟。
10． 充分水洗后，复染、脱水、透明、封片、镜检。
3） PAP 法（过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法）
1． 标定固定后， PBS 洗涤。
2． 1 ％ H2 O2 （或 1 ％ H2 O2 甲醇）阻断内源性过氧化物，室温 10 ～ 20 分钟。
3． PBS 洗涤 2 × 3 分钟。
4． 正常血清（二抗的正常血清）孵育，室温 20 分钟。
5． 滴加一抗，室温 1 小时或 4 ℃过夜。
6． PBS 洗涤 3 × 3 分钟。
7． 滴加二抗，室温 30 分钟。
8． PBS 洗涤 3 × 3 分钟。
9． 加 PAP 复合物，室温 60 分钟。
10． PBS 洗涤 3 × 3 分钟。
11． 0.04 ％ DAB ＋ 0.03 ％ H2 O2 显色 5 ～ 10 分钟。
12． 充分水洗。
13． 苏木精复染，封片观察。
4） 双 PAP 法
1 ～ 10 同单 PAP 法。
11． 二次加酶标二抗。
12． PBS 洗。
13． 二次加 PAP 。
14． PBS 洗。
15． 0.04 ％ DAB ＋ 0.03 ％ H2 O2 显色 5 ～ 10 分钟。
16． 苏木精复染核，封片，镜检。
5） ABC 法（卵白素－生物素－过氧化物酶复合物法）
1 ～ 8 同 PAP 法
9） 加 ABC 液，室温 60 分钟。
10） PBS 洗。
11） 0.04 ％ DAB ＋ 0.03 ％ H2 O2 显色 5 ～ 10 分钟。
12） 充分水洗。
13） 苏木精复染核，封片，镜检。
