HLA等位基因序列特异性探针（SSO）及其标记
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HLA 等位基因序列特异性探针（SSO）及其标记
（一）DRB1分型SSO探针
根据分辨率的要求选择。 常用的DRB1分型的SSO探针见表
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代号
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SSO探针的DNA序列（5’-3’）
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DR特异性
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L11
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TTCAAACTTAAGCTGCCAC
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DR1
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D11
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CTCATACTTATCCTGCTGC
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DR2
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N77
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TCTGCAGTAGTTGTCCACC
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DR3
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H33
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CTCTTGGTGATAGAAGTATC
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DR4
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E58
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CCAGTACTCCTCATCAGGC
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DR11
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L37
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AGCGCAGGAGCTCCTCCTG
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DR12
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G11
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CTTATACTTACCCTGCCAC
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DR7
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L74
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GTGTCCACCAGGGCCCGCC
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DR8（+1403）
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Y26
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CTGTGCAGATACCGCACCC
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DR9
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V11
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CTCAAACTTAACCTCCTCC
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DR10
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E71
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GGCCCGCTCGTCTTCCAGG
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DR13（1301，1302，1304）
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DR1（0103）
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DR4（0402，0414）
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DR11（1102，1103）
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K71
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CGGCCCGCTTGTCTTCCAG
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DR13-HAG（1303）
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H60
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GTTCCAGTGCTCCGCAGCA
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DR14（1401，1404，1407）
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N37
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AGCGCACGTTCTCCTCCTG
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DR3
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DR13（1301，02，04，06）
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DR14（1402，1403，1406）
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D37
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GAAGCGCAAGTCCTCCTCT
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DR2（DRBundefined0101）
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AV86
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GCTCTCCACAGCCCCGTAG
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DR2（DRBundefined02）
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DR1（0102）
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DR12
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（二）SSO探针标记
SSO探针标记可以采用放射性同位素标记，也可采用非同位素表记。下面介绍的是采用T4噬菌体多核苷酸激酶将放射性同位素γ-32 P标记在SSO探针上。
【试剂配制】
（1） SSO探针（10pmol/L）
（2） 10XT4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液：0.5mol/LTris-HCl（pH7.6）；0.1mmol/L MgCl2；50mmol/L二巯苏糖醇（DTT）；1mmol/L盐酸亚精胺；1mmol/L EDTA（pH8.0）
（3）[γ-32 P]ATP（比活5000Ci/mmol，10mCi/ml水溶液）
（4）T4噬菌体多核苷酸激酶
【操作步骤】
（1）配制标记反应混合液
SSO探针（10pmol/L） 1.0ul
10XT4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液 2.0ul
[γ-32 P]ATP 5.0ul
ddH2 O 11.4ul
（3） 在上述反应混合液中加入8单位（约1ul）T4噬菌体多核苷酸激酶，充分混匀，置37℃温育45分钟；
（4） 温育完毕后，置68℃10分钟，灭活T4噬菌体多核苷酸激酶。
【注意事项】
（1） 标记后的SSO探针比活应达到2000Ci/mmol，如果比活性太低，可在标记反应中补加8单位T4噬菌体多核苷酸激酶继续标记。
（2） 上述标记的SSO探针可直接使用，也可以采用柱层析分离后使用。
（3） 放射性物质的操作应严格遵守有关规定和采取适当的防护措施。
