HLA等位基因序列特异性探针（SSO）及其标记
互联网
2518
HLA 等位基因序列特异性探针（SSO）及其标记
（一）DRB1分型SSO探针
根据分辨率的要求选择。 常用的DRB1分型的SSO探针见表
|
代号
|
SSO探针的DNA序列（5’-3’）
|
DR特异性
|
|
L11
|
TTCAAACTTAAGCTGCCAC
|
DR1
|
|
D11
|
CTCATACTTATCCTGCTGC
|
DR2
|
|
N77
|
TCTGCAGTAGTTGTCCACC
|
DR3
|
|
H33
|
CTCTTGGTGATAGAAGTATC
|
DR4
|
|
E58
|
CCAGTACTCCTCATCAGGC
|
DR11
|
|
L37
|
AGCGCAGGAGCTCCTCCTG
|
DR12
|
|
G11
|
CTTATACTTACCCTGCCAC
|
DR7
|
|
L74
|
GTGTCCACCAGGGCCCGCC
|
DR8（+1403）
|
|
Y26
|
CTGTGCAGATACCGCACCC
|
DR9
|
|
V11
|
CTCAAACTTAACCTCCTCC
|
DR10
|
|
E71
|
GGCCCGCTCGTCTTCCAGG
|
DR13（1301，1302，1304）
|
|
|
|
DR1（0103）
|
|
|
|
DR4（0402，0414）
|
|
|
|
DR11（1102，1103）
|
|
K71
|
CGGCCCGCTTGTCTTCCAG
|
DR13-HAG（1303）
|
|
H60
|
GTTCCAGTGCTCCGCAGCA
|
DR14（1401，1404，1407）
|
|
N37
|
AGCGCACGTTCTCCTCCTG
|
DR3
|
|
|
|
DR13（1301，02，04，06）
|
|
|
|
DR14（1402，1403，1406）
|
|
D37
|
GAAGCGCAAGTCCTCCTCT
|
DR2（DRBundefined0101）
|
|
AV86
|
GCTCTCCACAGCCCCGTAG
|
DR2（DRBundefined02）
|
|
|
|
DR1（0102）
|
|
|
|
DR12
|
（二）SSO探针标记
SSO探针标记可以采用放射性同位素标记，也可采用非同位素表记。下面介绍的是采用T4噬菌体多核苷酸激酶将放射性同位素γ-32 P标记在SSO探针上。
【试剂配制】
（1） SSO探针（10pmol/L）
（2） 10XT4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液：0.5mol/LTris-HCl（pH7.6）；0.1mmol/L MgCl2；50mmol/L二巯苏糖醇（DTT）；1mmol/L盐酸亚精胺；1mmol/L EDTA（pH8.0）
（3）[γ-32 P]ATP（比活5000Ci/mmol，10mCi/ml水溶液）
（4）T4噬菌体多核苷酸激酶
【操作步骤】
（1）配制标记反应混合液
SSO探针（10pmol/L） 1.0ul
10XT4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液 2.0ul
[γ-32 P]ATP 5.0ul
ddH2 O 11.4ul
（3） 在上述反应混合液中加入8单位（约1ul）T4噬菌体多核苷酸激酶，充分混匀，置37℃温育45分钟；
（4） 温育完毕后，置68℃10分钟，灭活T4噬菌体多核苷酸激酶。
【注意事项】
（1） 标记后的SSO探针比活应达到2000Ci/mmol，如果比活性太低，可在标记反应中补加8单位T4噬菌体多核苷酸激酶继续标记。
（2） 上述标记的SSO探针可直接使用，也可以采用柱层析分离后使用。
（3） 放射性物质的操作应严格遵守有关规定和采取适当的防护措施。
