新的基因组测序技术

新的基因组测序技术

 

    多种测序技术正在发展之中，相关的确定DNA片段中出现核酸的方法之间有显著不同，但是这些技术迄今还未应用于高通量基因组测序。Pyrosequencing(Ronaghi，Uhlen和Nyren，1998)是一种以检测DNA合成中释放的焦磷酸盐为基础，利用在聚合酶反应中产生的可见光与合成的核酸数目成比例的测序技术。Polony测序法(Mitra和Church，1999)根据在显微镜载玻片上聚丙烯酰胺薄膜中生成PCR克隆或“Polony"；单碱基延伸测序反应在Polony上进行，由荧光模式得到测序结果。纳米孔道(Nanopore／ionchannel)测序法(Deamer和Branton，2002)则利用当单链DNA分子在外加电压下通过纳米尺寸的孔道时产生的离子电流阻滞来测序，电流阻滞的调制显示出分子的长度、组成、结构和动态行为。有序标记DNA模板光学定性方法的基础是DNA分子在特异的微通道和Post的液流中线性化，用荧光染料标记后进行光学检测。分子马达则是基于荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer，FRET)，当与荧光基团相连的DNA聚合酶激发荧光基团连接到正在合成的分子的碱基上时FRET就会发生。双染测序法和分子数据流读取则以相互作用为基础，例如FRET。最后，分子共振测序法通过测量电磁辐射强度的改变而实现，这种改变来自结合、合成DNA分子的固定聚合酶发生的构象变化。

 

    现在的难点在于哪些技术可以被证明适于大规模测序工作，及其会对结果的准确性和成本产生何种影响。但有一点似乎很清楚，即纳米技术和自动化技术的使用降低了成本、提高了测序速度。可能在不远的将来，就可以仅仅用数天或数小时获得任何一种人类病原体的完整基因组序列，与相关物种进行比较，可以进行快速的分型和诊断。

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