MSCs自我更新的集落形成单位测定

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MSCs
​无菌CCM PBSA 0.85%台盼蓝盐溶液 胰蛋白酶 EDTA
聚丙烯离心管 15 ml或50 ml 塑料组织培养皿 直径15 cm 移液器枪头 非灭菌结晶紫溶液 蒸馏水 改良的Neubauer血细胞计数器 移液器

(a)进行MSCs收集和传代。对悬液中的剩余细胞重新计数以确保准确性。

(b)用CCM制备浓度为1000个细胞/ml的MSCs悬液。

(d准备3个15 cm培养皿，每个加人25 ml预热的新鲜CCM。

(d)向每个培养皿中加人100μL悬液（100个细胞），晃动培养皿使细胞分布均匀，在37℃，5% CO₂环境下孵育3周。

(e)3周后，从CFU培养物中吸出培养基，用PBSA润洗培养皿3次。

(f)每个培养皿中加人10 ml结晶紫溶液，室温孵育5〜10 min。

(g)吸出染液，用蒸馏水润洗，直到背景被清除。

(h)计数每个培养皿中的集落数，取其平均值，计算贴壁率或“CFU潜能”（形成的CFU相对于接种个数的百分比）。培养良好的MSCs—般CFU潜能大于40%。

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