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转染为什么没结果

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1982

爱吃葡萄的猫:我做稳定转染,挑完单克隆用RT-PCR鉴定时,批不出我转染的那段基因表达,但是载体上的新霉素抗性基因能批出来,我鉴定了大概20个单克隆都是这样,开始以为是引物有问题,后来鉴定瞬时转染时能表达,应该就不是引物和条件的问题。大家有没有遇到过这种情况?帮我分析一下是什么原因?急等!

丁香园网友Sayid认为:

这种情况太常见了,也是我们还要对抗性阳性克隆进行PCR鉴定的直接原因。

由于目的基因表达阳性的克隆往往生长压力更大,所以生长旺盛的克隆更多是仅仅整合了neo基因的克隆,尤其是在单克隆化不及时的情况下,目的基因阳性克隆甚至因生长竞争而被排除。如果你的基因没有什么毒性,对此唯一的办法,就是继续单克隆化筛选。

本版精华贴,前辈讲的极好,建议你仔细看看

http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=70221&sty=1&tpg=6&age=0

丁香园网友nopain认为:

我做的也是这样。单克隆完后做WESTERN没做出来,现在瞬转做WESTERN也没做出来,怀疑是蛋白没有表达。

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