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GC测椒目仁油中α-亚麻酸

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摘要:目的:建立椒目仁油中α-亚麻酸含量测定的方法;方法:采用气相色谱法,将样品酯化后检测其中的α-亚麻酸的含量;结果在该色谱每件下测得椒目仁油中α-亚麻酸的平均含量为70.47%,精密度RSD=2.76%,平均加样回收率为98.36%,RSD=3.62%;结论:椒目仁油中舍有较多的α-亚麻酸,是一种极待开发利用的油脂资源。

关键词:α-亚麻酸 椒目仁油 气相色谱法

Abstract Objetives To determine the methods of measurement ofα-linolenic acid in the Zanthoxylum bungeanum Maxim seeds oil Methods To used by gas chromatography after the samples have been esterified. Results The average contents are 70.47%,the RSD of precision is 2.76%,the average rate of recovery is 98.36%. Conclusions Since the contents ofα-linolenic acid in the Zanthoxylum
bungeanum Maxim seeds oil is high,the oil can be a useful source to be developed.
Key Wordsα-linolenic acid Zanthoxylum bungeanum Maxim seeds oil gas chromatography

    椒目为芸香科植物青椒Zanthoxylum schinifolium Sieb.et Zucc.或花椒Zanthoxylum bungeanum Maxim的干燥成熟种子。秋季果实成熟时采收,晒干,除去果皮、果柄及杂质田。椒目含油约22-29%,高于大豆、棉籽的含油量;且椒目油中含有丰富的Ca、Mg、Fe、Zn及Sr、Mn等人体必须的矿物质元素。因此,椒目有望成为一种极待开发利用的油脂资源。
    亚麻酸是人体必须脂肪酸,具有重要的生理活性:有降血脂,抗癌,提高机体免疫力等多种作用;在体内转变成2O碳5烯酸(EPA)和22碳6烯酸(DHA),亚麻酸的研究,紫苏中芳香性生成分丁香油酚、α-蒎烯、紫苏醇等成分对人体具有参与神经细胞生物构成、增强中枢的功能圈。文献资料多为对紫苏子中α-均有较大的毒副作用。
1 仪器与试药
1.1 仪器:电子天平,METTLER TOLEDO GB-204;CSF-1A超声波发生器,上海超声波仪器厂;小型三用水箱, 北京医疗设备总厂; 气相色谱仪(Gas Chromatogram,GC),Agilent 4890D。
1.2 试药:椒目仁油,陕西盛华药业有限公司,批号20020506;α-亚麻酸(α-Linolenic Acid,250 mg/m1),Cayman Chemical,Catalog No.90210;十七酸(Margaric acid),E. Merck.Darmstadt,MoL_Gew270.46;甲醇、浓硫酸、正己烷等试剂均为分析纯。

2 实验方法
2.1 色谱条件: 色谱柱,HP-5石英毛细管柱(Crosslinked5%PH ME Siloxane 15mx0.53mmx1.5μm),柱温:185℃;FID检测器,温度:24O℃ ;进样口温度:24O℃;载气:氮气,流量30ml/min;氢气:30ml/min;空气:400ml/min;进样量3μL。
2.2 样品准备
2.2.1 对照品溶液的配置:精密量取仅α-亚麻酸对照品溶液0.04ml,甲醇溶解,定容至10ml。精密量取lml,加4ml甲醇,lmll:5的硫酸一甲醇溶液于80℃水浴回流30min,用流水使冷却后,加3ml蒸馏水稀释,再加正己烷萃取3次,每次3ml,收集上层液,定容至10ml,作为对照品溶液,备用。
2.2.2 内标溶液的配置:以十七酸作为内标,精密称取约7mg,按2.2.1的方法配置,作为内标溶液。
2.2.3 供试品溶液的配置:精密称取椒目仁油约20mg,十七酸约10mg,加4ml甲醇,lml l:5的硫酸-甲醇溶液于8O℃水浴回流30min,用流水使冷却后,加4ml蒸馏水稀释,再加正己烷萃取3次,每次3ml,收集上层液,定容至10ml,作为供试品溶液,备用。

3 实验结果
3.1 在该色谱条件下,可将仅-亚麻酸、十七酸及杂质较好的分离o
3.2 线性关系考察:分别精密量取对照品溶液0.5,1,1.5,2,2.5ml,各加入lml内标溶液,氮气吹干,精密加入0.3ml正己烷溶解,进样。 亚麻酸的峰面积对十七酸的峰面积的比值对 亚麻酸的浓度做线性回归,得方程为Y=4.4362X+0.39088,相关系数R=0.999,说明仅α-亚麻酸的峰面积在0.167―0.833mg/ml浓度范围内呈良好的线性关系。
3.3 校正因子的测定:根据3.2的测定结果计算得;校正因子为1.03,RSD=1.25%。
3.4 供试品溶液的测定:取2.2.3项下配制的供试品溶液3μL进样,按上述方法测得椒目仁油中α-亚麻酸的平均含量为70.47%。
3.5 精密度实验:取同一对照品和供试品溶液各3μL,按上述测定条件重复进样5次,测得α-亚麻酸峰面
积的RSD分别为2.76%,2.78%。表明该测定条件稳定,
3.6 加样回收率实验:精密量取2ml供试品溶液5份,分别精密加入lml对照品溶液,同法测定,按下式计
算。测得平均加样回收率为98.36%,RSD=3.62%。

测出α-亚麻酸总量-取样相当α-亚麻酸量
回收率=―------------------------------------------ x100%
添加椒目仁油中α-亚麻酸量

4 讨论
4.1 本实验对样品的处理方法进行探索,①用浓硫酸和甲醇直接酯化,由于大量结合于脂上的亚麻酸未能被酯化,故测出的含量偏低,不到20%;②酸水解后再酯化,未检出亚麻酸峰;③碱水解后再酯化,亚麻酸的峰与其他峰不能较好的分离;(4在碱性醇溶液中加热回流,测出的含量偏低,说明酯化不完全;改用酸性醇溶液回流,即本实验中所用方法,可将之完全酯化,且亚麻酸峰分离较好,故确定为样品处理方法。
4.2 实验中对样品酯化时的时间进行考察,少于30min时酯化不完全,测出的峰面积偏小;回流30min以上无明显变化,故选择回流时间为30min。

参考文献
[1]山东省卫生厅编,山东省中药材标准(1995年版)
[2]庄世宏,李孟楼,花椒籽油的成分分析,西北农业学报.2002,11(2):43-45
[3]Wang yingqian, Lai bingsen, Yan xiaolin,Lu ping,Zheng chenggui,Tan yafang Quantitative Determination ofα-Linolenic Acid from Perilla Frutescens Seeds Oil. Chinese Journa1 of Biochemical Pharmaceutics,1998,19(2).91-92
[4]Christon R Haloue R Durand G.Dietary polyunsaturated fatty acids and aging modylate lutathione--related antioxidants in rat liver[J].J Nutr,1995,125:3062
[5]阴健,郭立强,中药现代研究与临床应用,学苑出版社,1993,10;633

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