GC、GC/MS法

1. 尿样收集

健康男性(体重65 Kg)口服单次剂量10mg Selegiline 5片剂。分别收集所排各次尿液的全部及服药前的空白尿，于-20℃。

2.样品制备

取尿样5 ml，加入100 mg L-半胱氨酸，0.5 ml浓HCl，于100℃下水解30 min。冷却后以3 ml叔丁基甲醚提取，分离，弃去醚层。于水相加0.5 ml 12M NaOH，2 g固体缓冲剂(NaHCO₃：K₂CO₃=3：2，pH9.6)。以3 ml含二苯胺为内标的叔丁基甲醚/异丙醇(9:1)溶液， 振摇。分离提取液，于N2气下吹干， 以 1 ml乙酸乙酯溶解残渣，GC/NPD进样2 μL。之后于N2气下浓缩至约50 μL。于GC/MSD进样2 μL。然后吹干，于残渣中加入100 μL乙酸乙酯和100 μL三氟乙酰酐(TFAA)，70℃反应20 min。于N2气下吹干，再以100 μL乙酸乙酯溶解，GC/MSD进样2 μL。在进行selegiline代谢物amphetamine，methylamphetamine及norSelegiline尿中排泄趋势试验中，尿样提取程序如下：分别取0-72小时收集的各份尿样5 ml，加入0.5 ml 5M KOH，3 g NaCl，2 ml 5 ppm二苯胺(内标)的叔丁基甲醚溶液，振摇，离心，分离醚层，于GC进样2 μL。