哪位做过免疫动物,请多指教
丁香园论坛
1182
最近要免疫动物,所以搜集整理了一点方法。想请做过的ggjjddmm指导一下。看看有没有需要改进的地方?
制备多克隆抗体实验方案
动物:新西兰兔(年龄>3个月)
免疫佐剂:福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂
方法一:100ug Hexon protein 溶于0.5ml Tris-HCL缓冲液中, ,与等体积的福氏完全佐剂混合后,于家兔后肢及后脚掌多点皮下注射。以后每隔两周加强免疫1次,抗原改用福氏不完全佐剂配制,用量同前,在每次加强免疫7d后,用免疫双扩散实验检测抗体效价,当效价>1:16时,于放血前4d加强免疫1次,然后采血并分离血清.
方法二::纯化的Hexon protein (0.5mg/ml ) 1ml加入等体积的弗氏佐剂
进行乳化,采用颈部皮下多点注射的方法. 以后每隔两周加强免疫1次,抗原改用福氏不完全佐剂配制,用量同前,在每次加强免疫7d后,用免疫双扩散实验检测抗体效价,当效价>1:16时,于放血前4d加强免疫1次,然后采血并分离血清.
兔的取血:
1. 颈静脉取血
将兔固定于兔箱中,倒置使头朝下,在颈部上1/3的静脉部位剪去被毛,用碘、酒精消毒,剪开一个小口,暴露颈静脉,注射器向向下端刺入血管,即可取血.此处血管较粗,很容易取血,取血量也较多,一次可取10ml以上.用干纱布或棉球取血部位止血.
2. 兔耳缘静脉取血
选好耳缘静脉,拨去被毛,用二甲苯或75%酒精涂擦局部,小血管夹子夹紧耳根部,使血管充血扩张,术者持粗针头从耳尖部的血管逆回流方向入静脉取血,或用刀片切开静脉,血液自动流出,取血后面取压迫止血,一般取血量2~3ml,压住侧支静脉,血液更容易流出,取血前耳缘部涂擦液体事啦,可防止血液凝固.
3. 后肢胫部皮下静脉取血
兔固定于兔板上,见取胫部被毛,股部扎上止血带,使胫外侧皮下静脉充盈.固定静脉,右手持注射器,针头与静脉走向平行,取血后要长时间压迫止血,一般取血量2-5ml.
4. 股静脉取血
分离手术,注射器平行于血管,从股静脉下端向向心方向刺入,徐徐抽动针栓即可取血.抽动完毕后,要注意止血.股静脉易止血,用于纱布轻压取血部位即可.若连续多次取血,取血部位应尽量选择离心端.
我有一个问题:
我想静脉注射,个人觉得应该是可行的 ,但注射剂量应是多少?(ug /ml or mg/ml)。我要注射的是纯化后得到的蛋白,有的人说应该用mg/ml,有的人说用ug/ml?
如果有做过的,请不吝赐教!!!
谢谢!!!
制备多克隆抗体实验方案
动物:新西兰兔(年龄>3个月)
免疫佐剂:福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂
方法一:100ug Hexon protein 溶于0.5ml Tris-HCL缓冲液中, ,与等体积的福氏完全佐剂混合后,于家兔后肢及后脚掌多点皮下注射。以后每隔两周加强免疫1次,抗原改用福氏不完全佐剂配制,用量同前,在每次加强免疫7d后,用免疫双扩散实验检测抗体效价,当效价>1:16时,于放血前4d加强免疫1次,然后采血并分离血清.
方法二::纯化的Hexon protein (0.5mg/ml ) 1ml加入等体积的弗氏佐剂
进行乳化,采用颈部皮下多点注射的方法. 以后每隔两周加强免疫1次,抗原改用福氏不完全佐剂配制,用量同前,在每次加强免疫7d后,用免疫双扩散实验检测抗体效价,当效价>1:16时,于放血前4d加强免疫1次,然后采血并分离血清.
兔的取血:
1. 颈静脉取血
将兔固定于兔箱中,倒置使头朝下,在颈部上1/3的静脉部位剪去被毛,用碘、酒精消毒,剪开一个小口,暴露颈静脉,注射器向向下端刺入血管,即可取血.此处血管较粗,很容易取血,取血量也较多,一次可取10ml以上.用干纱布或棉球取血部位止血.
2. 兔耳缘静脉取血
选好耳缘静脉,拨去被毛,用二甲苯或75%酒精涂擦局部,小血管夹子夹紧耳根部,使血管充血扩张,术者持粗针头从耳尖部的血管逆回流方向入静脉取血,或用刀片切开静脉,血液自动流出,取血后面取压迫止血,一般取血量2~3ml,压住侧支静脉,血液更容易流出,取血前耳缘部涂擦液体事啦,可防止血液凝固.
3. 后肢胫部皮下静脉取血
兔固定于兔板上,见取胫部被毛,股部扎上止血带,使胫外侧皮下静脉充盈.固定静脉,右手持注射器,针头与静脉走向平行,取血后要长时间压迫止血,一般取血量2-5ml.
4. 股静脉取血
分离手术,注射器平行于血管,从股静脉下端向向心方向刺入,徐徐抽动针栓即可取血.抽动完毕后,要注意止血.股静脉易止血,用于纱布轻压取血部位即可.若连续多次取血,取血部位应尽量选择离心端.
我有一个问题:
我想静脉注射,个人觉得应该是可行的 ,但注射剂量应是多少?(ug /ml or mg/ml)。我要注射的是纯化后得到的蛋白,有的人说应该用mg/ml,有的人说用ug/ml?
如果有做过的,请不吝赐教!!!
谢谢!!!