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求助大家:PBMC可以诱导分化pDc吗,该如何做呢,请各位大神指教

相关实验:IPTG 诱导蛋白表达实验

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Assyma

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2 个回答

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龙大人驾到

有帮助

PBMC可以诱导分化成pDC。以下是一种常用的方法:


1. PBMC提取:从新鲜采集的人类全血中提取PBMC,方法包括梯度离心、红细胞淋巴细胞分离液等。


2. 培养PBMC:将PBMC在含有GM-CSF和IL-4的培养基中培养5天以获得生长迅速的DC。


3. 刺激分化:将培养的DC在缺乏血清的培养基中刺激24小时,通常使用CpG DNA进行刺激,也可使用病毒、细菌等免疫刺激物。


4. 分化pDC:将刺激过的DC经过进一步培养,最终分化为pDC。


需要注意的是,不同实验条件下所得到的pDC的纯度和功能各有不同。此外,还有其他方法可以诱导pDC分化,如使用Flt3L或type I interferon (IFN-I) 等。具体的实验操作应根据所需的目的进行设计优化。

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loveliufudan

有帮助

PBMCs(外周血单个核细胞)可以通过适当的处理诱导分化成为pDCs(Plasmacytoid dendritic cells,浆细胞样树突状细胞)。以下是一种可行的方法供您参考:

采集外周血并分离PBMCs:通过常规离心等方法将血液中的白细胞分离出来,并使用密度梯度离心法将PBMCs分离出来。

用适当培养基培养PBMCs:用适当的细胞培养基(如RPMI-1640培养基)培养PBMCs,加入10%的人血清和靶向pDCs分化的生长因子,例如:

1,000 U/ml GM-CSF (Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,粒-巨噬细胞集落刺激因子)和1,000 U/ml IL-4 (Interleukin-4,白细胞介素4)

20 ng/ml Flt3L (Fms-related tyrosine kinase 3 ligand,酪氨酸激酶3相关配体)

分化pDCs:将PBMCs分化为pDCs需要培养6-7天。在培养的过程中,根据需要定期更换培养基。分化后,可以通过流式细胞仪检测pDCs的表面标记物,如BDCA-2和CD123。

总之,通过添加特定生长因子,可以诱导PBMCs分化为pDCs。这是一种常规方法,但是需要根据您的具体实验需要进行优化和改进。

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