【求助】构建载体时，何谓正向插入与反向插入

麻烦问大家一下，构建载体时，何谓正向插入与反向插入啊，两者有何区别，跑胶以后的片段长度应该是一样的吧？谢谢各位啊！

载体总的大小一样，但经过酶切后产生的片段长度有区别，不然怎么鉴定是正向还是反向，有的载体只有方向正确了才能进行下一步的转染表达，建议还是多看点相关的文章！

一般的克隆型载体，其方向性就不是特别重要了，它关键的是目的片段的一个载体，最典型的没有方向性的就是T-A连接了。
表达载体构建过程当中，片段插入的方向往往具有重要的作用。其中片段的插入方向所谓的正向与方向均是相对于载体的复制起始的方向而言的。
酶切连接构建载体时需注意的正反像的问题主要是基于酶切插入的方向问题，对于不同的双酶切插入它的方向性就比较明确了。比如在构建淀粉酶表达载体的时候，利用双切获得淀粉酶ORF序列，同样利用双切插入载体时就要保证atg序列的上游为启动子，taa后是终止序列，这样才会有可能获得表达的酶蛋白，反之就不可能了。而对于有些载体过程中的单切连接或平末端连接其方向性就没有那么明确了，往往在连接后需要通过如PCR的方法去筛选获得自己的目的连接的克隆。。
很明显，不同的方向对于片段本身没有任何影响，所以其大小自然没有变化，一般的凝胶电泳也不会有显示了。。
如果还不明白，建议楼主要多看看分子克隆先关的资料和书了，先了解然后再去动手。。工欲善其事，必先利其器。。。

好的，谢谢大家啊!不胜感激啊！