相关细菌存在时的悬浮培养

培养物
Sorensen's 缓冲液
SM 琼脂平板 玻璃棒 Erlenmeyer 锥形烧瓶

1. 用 1 ml 大肠杆菌 B/r 的过夜培养物接种 15 cm 的 SM 琼脂平板，均匀涂布平板表面。

2. 用玻璃棒收获厚菌苔，并充分重悬于 10 ml 1X Sorensen's 缓冲液中，用 10 ml 1X Sorensen's 缓冲液洗平板一次，并加到细菌悬液中。向细菌悬液中加入 40 ml 1X Sorensen's 缓冲液并充分旋转混匀。这种细菌储存液可于 4℃ 储存 1 周。

3. 加 5 ml 细菌储存液到一个灭菌的 50 ml Erlenmeyer 锥形烧瓶中，与来自一个果实体的一个孢子头共同孵育。

4. 于室温以 240 r/min 振荡培养 16~24 小时。

5. 用血细胞计数器计数细胞数。

6. 以此培养物作为所需体积新培养物的种子液。

7. 以 100 g 离心力进行差速离心 2~5 分钟，除去残留的细菌以收获细胞，将细胞重悬于 1X Sorensen's 缓冲液，再次离心沉淀细胞。