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盘基网柄菌的培养方法实验

实验分类:

细胞实验

最新修订时间:

简介

本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

来源:丁香实验

操作方法

细菌平板上的培养

1. 用任何营养丰富肉汤制备大肠杆菌 B/r 或产气克雷伯杆菌的过夜培养物。 2. 用营养肉汤或 1X Sorensen's 磷酸缓冲液对盘基网柄菌进行一系列稀释,使其细胞密度为 500 个细胞/ml,以便于铺盘。 3. 以 0.5 ml 细菌培养物和 0.1 ml 盘基网柄菌稀释物接种一个 10 cm 的 SM/5 琼脂平板,用玻璃棒将其涂在平板表面。 4. 置于室温培养几天。

相关细菌存在时的悬浮培养

1. 用 1 ml 大肠杆菌 B/r 的过夜培养物接种 15 cm 的 SM 琼脂平板,均匀涂布平板表面。 2. 用玻璃棒收获厚菌苔,并充分重悬于 10 ml 1X Sorensen's 缓冲液中,用 10 ml 1X Sorensen's 缓冲液洗平板一次,并加到细菌悬液中。向细菌悬液中加入 40 ml 1X Sorensen's 缓冲液并充分旋转混匀。这种细菌储存液可于 4℃ 储存 1 周。

无菌培养基中的培养

一、在塑料培养皿上的培养 1. 向 1 个 10 cm 的塑料培养皿中加入所选的培养基 10 ml,接种细胞或接种孢子头。每天用倒置显微镜检查平板,以监测细胞的生长和纯度。 2. 每三天换培养液一次。将旧培养液吸走,从培养皿的边上加入新鲜的培养液。 3. 当细胞生长到汇合成一片时,应转种到新培养皿中。用巴斯德吸管轻轻吹打培养液以悬浮细胞,取一滴细胞悬浮液接种到盛有新鲜培养基的新培养皿中。

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